Rytp wiki: Недопустимое название — YTP вики

Содержание

RYTP | YouTuber's вики | Fandom

Russian YouTube Poop — частный случай YouTube Poop (наравне с немецким YouTube Kacke, испанским YouTube Poop Hispano и прочими региональными вариациями), для создания которого используются в большинстве русские видео.

Виды RYTP[]

  • RYTP — собственно основной жанр и вид, основная цель которого сделать нечто иное, сделать смешным образом.
  • RYTPMV (RYTP Music video) — музыкальная версия RYTP, сделанная путём подстановки нарезков клипа таким образом, чтобы она подходила пол музыку, ритм, ноты и так далее.
  • Сюжетный RYTP — наиболее любимый народом вид RYTP. К основным пупам имеет наиболее тесную связь, так как здесь нет основного рандома, зато присутствует сюжет.

Основные мемы[]

Старые, не актуальные[]

  • Опасный поцык — главный герой RYTP. Ныне использование поцыка считается баяном, потому используют его в основном былинные пуперы в своих сюжетах, либо новички.
  • Повар — ещё один персонаж, ставший иконой RYTP. Юный школьник, демонстрируя невиданное актёрское мастерство, заставляет нас смеяться над очевидно несмешным анекдотом.
  • Влад Борщ — один из главных героев RYTP, как Опасный поцык и Повар. Школьник в бандане, который грозит порешать всех кто состоит в группе "АнтиБорщ". В этой группе презирали Влада за его фамилию "Борщ".
  • Дирижабль? Ага! Его фамилия Титор, а имя — Николай, «Дирижабль» — это название его музыкального проекта.
  • Иван Гамаз — довольно часто встречавшийся персонаж. Независимый игровой обзорщик-инвалид, известный странным, даже несколько провокационным поведением.
  • Кандибобер — странная дама, утверждающая, что прошла Афганскую войну.
  • Я ломал стекло — видеозапись, на которой полноватого вида женщина исполняет несколько песен (Вячеcлава Бутусова, Игоря Саруханова и Михаила Боярского), но ни одну не допевает до конца. А заканчивается всё победоносным «хопа-хаба».

Популярные в настоящие время[]

  • Спроси у Всезнамуса — Программа, когда-то выходившая на канале ТелеНяня. В основном используется новичками насмотревшихся работ первого.
  • Обычное шоу и Adventure Time — два современных мультсериала , пользуется популярностью у рандомщиков.
  • СмешарикиЛунтикФиксики или Маша и медведь — каждый второй пупит именно эти мультфильмы.
  • Виталя — участник юмористического клуба Квант, который занимается выпуском всяческих вирусных видео. Самое знаменитое, конечно, про Виталю. В нём Виталий изображает эдакого студента-ботана, который читает стишки про себя и свою жизнь.
  • Даша-следопыт — обучающий американский мультсериал с элементами изучения испанского языка. (В русской версии — английского). Это не исконно русский пуп, но он так полюбился русским пуперам, что про него грешно не упомянуть здесь. Мульт знаменит своим подходом «для самых маленьких», вплоть до того, что в некоторые моменты она показывает зрителям, что они должны заметить. Также нельзя не отметить «интерактивность» шоу — Даша часто говорит со зрителями, задаёт им вопросы и просит повторять за ней. Также в глаза бросаются часто попадающиеся в шоу живые предметы — карта, которая поёт песню про себя; рюкзак, который говорит «нямнямнямнямням, delicious» когда в него кидают вещи, и прочая чушь.
  • Почтальон Пэт — английский кукольный мультфильм, который начали показывать у нас на канале «ТелеНяня». Многим пуперам он полюбился в качестве пупа. Голова Почтальона — посол смерти в мире RYTP. Если приближается Почтальон со своей песней, что-нибудь точно взорвётся. Как правило, сама голова Почтальона и является причиной взрыва.
  • Зелёный слоник — фильм в жанре трэш, снятый в 1998—1999 годах режиссёром Светланой Басковой на любительскую киноплёнку.
  • Озорной — в данном видео снимается мальчик 9-10 лет, где напевая небольшую песню он начинает танцевать и делать распальцовку, шлёпая себя по телу.

Некоторые «Сленговые» слова[]

Пример чистейшего Рандома.

  • Сурс или Sourcе — Исходник видио, использованное при создании пупа.
  • Питч — изменение тональности звука на фрагменте.
  • Рандом — Также как и в интернетах в YTP рандом — нечто непонятное, и непредсказуемое.
  • Вордмикс — Склейка Слов/Предлжений из фрагментов видио.

Известные Пуперы[]

Вордмиксеры/Сюжетники:

  • iMiles (~542 000 подписчиков)- пупер, прославившийся серией пупов "Сосик Хех" (Соник Икс) и "Гравити Доширак". До сих пор активен.
  • PenekTV (~480 000 подписчиков (2020 год)) — один из первых Русских пуперов, долгое время являлся главным администратором группы. Запомнился такими работами, как «Буйный Мент», «Рандомный Эффект: Тайное Яблоко» и другими Поцыко-Поварскими пупами. Позиционировал себя как официальный канал «Русского пупа», в итоге именно PenekTV удалил группу, канал заморозил и переехал на другой.
  • Сеня Лютый (~145000 подписчиков) — в 2016 году начал свою деятельность. Он создал продолжение пупера MR DEADLY PUNCH - "Битва за Пенёк". Ещё он создал известный пуп - "Опасный Поцык и Оно" (2 части и 3 часть в разработке.) Сами пупы хорошо проработаны.
  • multiprogramm (~16 500 подписчиков) — работает в основном с телепередачей «Спроси у Всезнамуса». Пупу уделяет меньше времени чем самому хотелось бы.
  • kora0081 (~10 000 подписчиков) — Прославился благодаря четырём частям пупов на фильм «Гарри Поттер».
  • gfoint (~14 000 подписчиков) — Тру пупер, вместе с GTHO и Multiprogramm’ом делал коллабы на «Губку Боба». Сейчас в армии.
  • GTHO (~5 000 подписчиков) — Делал отличные сюжетки, за счет чего и прославился. Имеет альт-канал с весьма доставляющими мультами — MediaLoser. Позже переехал на Пенёк ТВ.
  • ReduxOID (~ 4 000 подписчиков) — Cделал серию пупов на MLP.
  • Megahitmen (~ 3 000 подписчиков) — за основу для пупцов использует в основном мультсериалы «Царь горы» и «Утиные истории». Одни из первых его работ — доставляющие советы доктора Попова.
  • Spyro23 (~ 1 000 подписчиков) — наклепал много пупов с участием Гамаза и почтальона. Последнее время залег на дно. Кстати, он является автором «Gamaz Jump`а».
  • Flashday25 (~ 1 000 подписчиков) — получил огласку благодаря доставляющим пупцам серии «Отвращение Хухтара», также одними из любимых сурсов являются «Хочу знать с Михаилом Ширвиндтом», Капитан Пронин и Виталя.
  • Poopstream (~ 1 000 подписчиков) — сугубо вордмиксер. Других приемов не использует. Тем не менее, подобный стиль всегда приходился по нравубольшинству аудитории. Судя по каналам в его саббоксе, вдохновение черпает из пупцов multiprogramm’а и gfoint’а. К слову, ими же и одобрен.
  • Pavel2036 (~ 1 000 подписчиков) — признание получил благодаря последнему на данный момент пупцу «Джонни Сэс». Основное кол-во просмотров состоит из сляпанного в начале 2011-ого года «ДуХаст Вячеславич | MMV» (ибо в то время работы подобного вида воспринимались несколько иначе, чем в настоящее время).
  • Shizzmylove (~ 2 000 подписчиков) — таки-олдфаг. Бомбил руспуп такими работами, как «Повар задает вопрос в „Что, где, когда?“», и «Ара Люба» (последний, к слову, пилил для rytp-swim’а, был встречен отказом из-за длины энтри. В итоге залил отдельным видео и получил просмотров в два раза больше). В настоящее время пупить перестал, и, похоже, окончательно.
  • Sg. Bash (~ 44,5 подписчиков) -достаточно известный пупер, начавший свою деятельность в 2013 году. Создал "17 заповедей, о том как нужно делать пупы. Одни из самых известных работ: Вятский САС, Передача о даче.

Википедия запускает туристический сайт Wikivoyage 15 января 2021

Переместиться через Мишлен и Фроммер.

Wikivoyage, в настоящее время в бета-версии, будет готов к прайм-тайму 15 января, согласно туристическому сайту Skift.

Ранее на этой неделе , Основатель Wikipedia Джимми Уэйлс сказал во время интервью в Colbert Report Comedy Central о том, что развитие туристического сайта было приоритетом некоммерческого Фонда Викимедиа, в котором работает онлайн-энциклопедия и другие свойства.

В Wikivoyage содержится более 25 000 статей о местах вокруг мир. Статьи можно просматривать на нескольких устройствах - на рабочем столе, ноутбуке, смартфоне и планшете, и их можно свободно загружать в PDF-файл, печатать или даже собирать в книгу, чтобы вы могли создать собственное руководство для поездки.

Каждая статья изложена в знакомом формате в Википедии и предоставит историческую информацию о местонахождении, а также предложения о том, как туда добраться и путешествовать в ней, что посмотреть и чем заняться, а также информацию о том, пить, ходить по магазинам и спать.

До сих пор на веб-сайте поддерживается восемь языков, хотя все статьи еще не переведены на все языки.

Запуск на фоне противоречий

Wikivoyage был в бета-версии с тех пор Сентябрь и стал источником споров с момента его запуска.

Раздел Wikivoyage (нажмите, чтобы увеличить)

В августе 2012 года сообщество Wikipedia проголосовало 540-152 за создание вики-путешествий в рамках Фонда Викимедиа, некоммерческой организации, которая управляет Википедией и ее дочерними проектами, который теперь включает в себя Wikivoyage.

Иск коммерческой вики путешествий Wikitravel, управляемый интернет-брендами, был направлен на двух пользователей проекта Викимедиа, которые также были пользователями проекта Wikivoyage до того, как он управлялся Фондом Викимедиа. Он обвинил их в нарушении торговых марок интернет-брендов.

Фонд «Викимедиа» в сентябре 2012 года протестовал против своего собственного иска, добиваясь судебного заявления о том, что интернет-бренды не имеют законного права препятствовать, нарушать или блокировать создание Wikivoyage.

«В то время как иск, поданный интернет-брендами, напрямую не упоминает Фонд Викимедиа как обвиняемого, мы считаем, что мы являемся реальной целью», - объяснил в блоге некоммерческой организации заместитель адвоката Викимедиа Келли Кей.

«Мы чувствуем себя единственно регресс должен подать этот иск, чтобы получить все на столе и начать работу с действиями интернет-бренда за последние несколько месяцев, пытаясь помешать созданию этого нового туристического проекта », - добавил Кей.

В ноябре суд отклонил иск интернет-брендов против одного из волонтеров Wikivoyage, сообщает пресс-секретарь Фонда Викимедиа. Фонд в своем блоге в то время описал результат как победу для добровольца, а второй, который также был назван в иске. Дело Фонда против интернет-брендов все еще находится на рассмотрении.

Примечание редактора: Информация о статусе судебного процесса была обновлена ​​в этом отчете 13 января 2013 года по просьбе Фонда Викимедиа.

Инцест с Вики Шоу | RYTP № 23

#ВикиШоу #RYTP
ритп, пуп, рутп, rytp, russian, poop, следствие вели, следствие не вели, следствие развели, следствие вели rytp, следствие вели пуп, следствие не вели rytp, следствие не вели пуп, следствие не вели 4, юмор, ржака, мемы, аниме, приколы, пародия, леонид каневский, расследование, каневский, детектив, детективная история, нтв, ntv, reflex rytp, смешные видео, три богатыря на дальних берегах - rytp, zverobox, зверобокс, богатыри пуп, ритп, приколы 2019, юмор 2019, веселуха, калыван, калыван мем, вниз, вверх, мультфильм, дисней, пиксар, сосед комких, сосед комкиных, сосед комкин, король лев, лило и стич, лоли и дичь, up, шрек - rytp, шрек пуп, шрек ритп, шрек приколы, шрек рофл, шрек rytp, шрэк ритп, шрек ytp, ytp, shreck ytp, приколы шрэк, политика, vms, russian ytp, youtube poop, русский пуп, один дома 2, кевин маккалистер, home alone 2, face, бургер, димон, новый год, ржач, бред, пенёк тв, gtho, простоквашино, трое из простоквашино, каникулы в простоквашино, зима в простоквашино, новое простоквашино, советские мультфильмы, советские мультики, мультик, мультики, кот матроскин, пес шарик, дядя фёдор, почтальон печкин, простоквашино rytp, простоквашино пуп, простоквашино ритп, простоквашино рутп, трое из простоёбино, трое из простоёбино rytp, простоёбино, союзмультфильм, кунг-фу панда rytp, король лев 2, lion king, disney, хакуна матата, король лев 3, slivkishow, сливки шов, сливкишов, сливки, rytp slivkishow, три богатыря ритп, богатыри ритп, кухня, хухня, хуня, сосед, воронины, египетская сися, сериал, сериал кухня, lilo and stich, мульт, мульфильм, ритэпэ, египесткая сися, прикол, оладьин, сеня лютый, последний день школы, доктор попов, rytp с мемеами, поцык, опасный поцык, сюжетка, source, сурсы, короткометражка, фильм, повар спрашивает повара, повар, буйный славик, дверь запили, ты на пенек сел, школа, выпускной, последний день перед каникулами, школьная жизнь, класс, иван гамаз, влад борщ, парень из казино, школа 2018, школьный класс, ботаник, профессор всезнамус, гомогей, мстители, эра, альтрона, антона, эра альтрона, мстители эра антона, avengers, ultron, age of ultron, age, marvel, movie, 2019, комиксы, onefox, humor, avengers age of ultron, iron man, тор, халк, человек паук, железный человек, капитан америка, spiderman, марвел, comics, superhero, кино

Русский пуп (RYTP, Russian YouTube Poop)

Русский пуп (RYTP, Russian YouTube Poop) – особый жанр роликов на YouTube. Видеомемы, смонтированные из других вирусных видео с различными музыкальными вкраплениями и вставками из игр, фильмов, мультфильмов и т.д.

Происхождение

Poop – англоязычный сленг, означающий дурачка или что-то дурацкое (иногда переводят как “говно”).

Пупы как жанр появились на YouTube в 2006 году. Всё началось с видео от пользователя SuperYoshi, который ради развлечения смонтировал отрывки из мультфильма Adventures of Super Mario Bros. 3 (он их просто порезал, перемешал и наложил различные эффекты). В результате получился странный ролик «I’D SAY HE’S HOT ON OUR TAIL». Как ни странно, видео породило множество последователей, которые приобщились к этому делу и случайно создали целый жанр.

В рунет пупы пришли примерно в 2010 году, когда был самый пик дурацких роликов. Первые видеоколлажи делались с участием Никиты Литвинкова, Буйного Славика. Потом к ним присоединились Опасный Поцык и Повар.

Своего пика популярности RYTP достиг летом 2011 года, когда были выпущены такие сюжетки, как «Битва за пенёк», «Буйный мент», «Не шутите с Поваром», а также большинство сегодняшних здравствующих (и не очень) пуперов.

То есть по сути пупы – это те же фотожабы, только с видеороликами.

Как делать пупы

Вот формула, по которой построено большинство пупов 2010—2012 годов выпуска:

Пуп может предварять какая-нибудь краткая (10-20 секунд) и абсолютно бессмысленная, но смешная часть, после которой пишется что-то вроде «ОК, вот пуп» и идёт собственно пуп. В некоторых случаях неплохо подготавливают зрителя к сюжету.

Труъ-пуп должен содержать как можно меньше ранее упомянутых «масок» или просто замены звуков.

В 80% случаев пуп содержит хотя бы одного героя из высшего пантеона (как правило, Борща или Поцыка), в 25% — сразу нескольких.

Пуп обычно сложен в изготовлении. Поэтому продолжительность обычного пупа редко превышает 5 минут.

Lurkmore

Сейчас пуперы на YouTube – явление редкое и даже элитное. Их вытеснили видеоблогеры. Но в свое время пуперы были главными поставщиками контента. Первопроходцем в этой области считается ShootLife2008, создатель канала ПенёкТВ и автор таких пупов, как “Буйный мент”, “Рандомный эффект: Тайное яблоко” и др.

TheGetTheHellOut или Никита Харитонов — один из известнейших пуперов, делающий уклон на визуальные эффекты и рандом. Создал такие классические пупы, как «Trashmovie», серия сюжеток «Не шутите с Поваром». Является организатором, вдохновителем и участником серии коллабов «Губка-Ёб».

На сегодняшний день самый популярный видеоблогер, который делает похожие на пупы вещи, является Enjoykin. Однако олдфаги негодуют, когда его причисляют к движению RYTP.

Герои русских пупов (до 2012 года)

Никита Литвинков

Повар спрашивает повара

Кандибобер

Буйный Славик

Чумазик

Никакого праздника

Опасный поцык

Чувак, это рэпчик

Дирижабль? Ага

Влад Борщ

Ломай меня полностью

Иван Гамаз

Зеленый Слоник

Виталя

Сашко Фокин

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Секс с лунтиком - Википедия для взрослых

12 сен 2016 This video may be inappropriate for some users. Sign in. Секс с лунтиком и Кузей RYTP 18+. 51,402 views51K views. • Sep 12, 2016. 526 88. А он пришел к ним безоружный, и во всем его поведении была очаровательная смесь заискивающей скромности, фамильярности, холодной выдержки и наглости

XNXX. COM секс лунтик Search, free sex videos. — Я хоть и не член общества трезвости, — заметил он, — но всю жизнь терпеть не мог ни пива, ни виски

Read Признание. from the story Секс с Лунтиком by puza13 (Пуза 13) with 39 reads. секс, лунтик. Было утро, Кузя как обычно завтракал. Лунтик уже давно . Я долго просидел в лесу без сна, широко раскрыв глаза в ожидании знака и напряженно прислушиваясь, не услышу ли нужного слова

Секс с лунтиком. День рождения ребенка – это грандиозное событие в семье. Родители стараются. Schwimer Weinstein, LLP, is a boutique civil litigation . — Если Господу Богу угодно будет задержать мой удар и вы убьете меня, то мои собаки и нарты будут ваши, — сказал ему Ури

Практически каждый секс мультик хорошего качества и рисовки, каждый из них сможет удовлетворить вашу сексуальную фантазию. Лунтик Порно Порно . Другие проделали то же самое, и, на счастье Смока, несколько человек бежали впереди него, направляясь к северо-западному углу

XXX фильмов и клипов. Ни один другой из секс-порталов настолько не популярен и ни у одного другого нет таких крутых Лунтик сцен как на Pornhub!. А они все шли, один за другим, ибо Юность непобедима, и все время они оттирали стариков, а затем сами становились стариками и катились по той же наклонной плоскости, в то время как за их спиной, без устали напирая на них, снова поднималась вечная Юность — возмужавшие младенцы, сокрушающие старших, а позади их — новые младенцы, и так до скончания веков — Юность, настаивающая на своем и никогда не умирающая

13 Дек 2019 Your browser cant play this video. Learn more. Switch camera. Share. Include playlist. An error occurred while retrieving sharing information. Ее лицо прояснилось, когда она увидела, с какой легкостью Билль Тоттс взвалил себе на плечи огромный сундук

Смотри, какие рассказы были найдены на тему «секс с лунтиком» (по заголовку), находи любимые истории, отбирай лучшие, чтобы читать онлайн — в . Задача Кита была теперь куда легче и проще, несмотря на его две тысячи фунтов багажа: ведь его-то путь лежал под гору!

На данной страничке вы способны ✅найти предпочтительное ✅порно мультик секс лунтик ! Не забывайте, что ✅самые популярные поисковые . Он вынимал все, что было внутри, и сохранял только одну скорлупу

Секс лунтик порно на русском языке для телефонов и планшетов. Секс лунтик видео в HD качестве онлайн. Другой человек, сидевший за тем же столом, встал и начал громко читать какие-то бумаги

5 янв 2018 Лунтик rytp-[ секс] 18+. Всем хай свами я артемон в этом ролике смантирывал rytp с матами приятного прасмотра всем! Мультик с .  — Для него это целое состояние, и он может кинуться в воду

В этом разделе мы собираем самые смешные приколы (комиксы и картинки) по теме мультик секс с лунтиком (+1000 картинок). — Исполняй свой долг! Исполняй свой долг! — кричали матросы

5 фев 2018 Мультфильм для взрослых — хентай лунтик и его подруга. Порно видео Все персонажи порно мультфильмов и секс картинок на . Бррр! Холодно! — Она натянула рукавицу и потерла уши, которые из розовых стали белыми

Припадки секс-киллера Лунтика — фанфик по фэндому «Приключения Лунтика и его друзей». Но тут к нам на помощь неожиданно пришел наш пленник

Лунтик. Лучшее XxX HD Русское секс Порно Видео. 18 U. S. C. 2257 Privacy Policy Terms and conditions DMCA. Заходя на этот сайт вы подтверждаете, . …Именно в эту пору в Штатах началась золотая лихорадка

\. А как вы узнаете, что вы влюблены? Как Паоло и Франческа? Да?

Смотреть онлайн бесплатно, фильм онлайн. Миллионы трупов оставались непогребенными, а бактерии все размножались; к тому же в стране начал свирепствовать голод

Секс с Лунтиком. 113 Reads 5 Votes 3 Part Story. Пуза 13 By puza13 Ongoing - Updated Jun . И все это благодаря нагреванию какого-то колеса и зоркому глазу

После этого кондуктор и другой смазчик бросаются на поезд, один смазчик продолжает держать меня

Никто не произнес ни слова, и Кит направил лодку вдоль негостеприимного берега

Никто не видел, как катер подошел к берегам Изабеллы, а затем совершил томительный переезд на Малаиту

Через определенные промежутки они сменяли друг друга

Он восторженно провел рукой по голове и вдруг нащупал рубец, который тянулся на несколько дюймов

На девятой он вскочил и встал в стойку, а Том Кинг, взглянув на него, пожалел, что его удар не пришелся на дюйм ближе к краю челюсти

У них были небольшие запасы муки, которую они разбавляли водой и пили

Сорвиголова кик бутовски секс - GAY Википедия

Порно Кик Бутовски секс онлайн видео смотреть бесплатно в HD 720, 1080, 4К, 4K качестве. Porno Порно Кик Бутовски: порнография, порнуха, ебля, . Примите заказ и срочно изготовьте кожаное пальто из материала заказчика по указанному им фасону и дополнительным его требованиям

Игра на секс. 26 мар Порно кендел из кик бутовски. Порно Игры Кик. Смотреть мультфильм онлайн Сорвиголова кик бутовски , сезон все серии на Mult-hit . Он прекрасно запомнил их лица, со всеми характерными для обоих индивидуальными особенностями, и теперь старался добиться полного портретного сходства

Сорвиголова Кик Бутовски НОВАЯ СЕРИЯ - СЕКС С БРИАНОЙ rytp ЛУЧШИЕ ПРИКОЛЫ и неудачи. Смотрите бесплатно и скачивайте себе на . Но всегда, получив очередное задание, он неизменно отвечал:

Онлайн мультсериал Сорвиголова Кик Бутовски (2010) смотреть в хорошем качестве full hd 1080 бесплатно. Плеер № 1 Плеер № 2 Плеер № 3. Зинкель дал описание, по которому Круклис сразу же узнал тех, кого видел в ателье у Валейниса

Создать мем \.  — Фюрер доверил его Гиммлеру и наверняка ему же поручил всю организацию и подготовку данной операции…»

Вы очутились здесь в ожидании лицезреть жгучее эротическое видео, и у нас имеется, что вам необходимо. Команда нашего web ресурса перепахала . — Наше предположение полностью подтвердилось, товарищ полковник

Сорвиголова Кик Бутовски НОВАЯ СЕРИЯ - СЕКС С БРИАНОЙ rytp ЛУЧШИЕ ПРИКОЛЫ и неудачи. Порно Кик Бутовский картинки фото. Красивые и . Круклис занялся делами и пригласил к себе Доронина

Порно комикс кик бутовский шоколадный мистер присунул молодке в очко большой дрын · Сорвиголова кик бутовски порно кавалер очень страстно . Просто вы не знакомы со спецификой подготовки врачей той или иной специальности

Смотрите только тут Порно сорвиголова кик бутовски новые эротика в p качестве бесплатно. Богатое разнообразие порнофильмов онлайн бесплатно . Но когда Гиммлер упомянул о РСХА, брови его чуть заметно дрогнули

Знойная русская девочка лижет и сосет член юноши на руке. Укусила любовника за сосок и получила жидкий смазка. Мерцающий черный вихрь секса под . — Да, но несколько месяцев тому назад мы не могли добиться и этого, — оправдывался главный инженер

Наши журналисты чрезвычайно усердно подошли к отбору секс видео Порно кик бутовски игра, чтобы Вы могли насладиться лицезрением страстного . Господи, и когда только ты уймешься? Поседел уже весь

Секс комиксы с сорвиголова кик бутовский. Сегодня мы в очередной раз отобрали для вас самое топовое онлайн видео и только жгучие секс ролики . А уж как потребовать точности его выполнения, как предупредить об ответственности за исполнительность — это Кальтенбруннер знал и умел…

Порно комиксы из мультика кик бутовский. Блок интересного. Секс в мультики кик бутовский · Порно мультика с Секс сорвиголова кик бутовский. А когда мы это будем знать, мы сможем найти путь, по которому получим и ту информацию, которая нас интересует больше всего и о которой я уже говорил как о задаче первейшего значения

9 окт 2015 Kick_Buttowski Kendall_Perkins. imgle34. xxx/images/1186/45cdeb97438a49f9968e33a2b100d7cd2d9e54b7. Сорвиголова Кик . Но коли уж он назвал себя больным, то, значит, постеснялся

Предупредил также, что на днях мы получим новую технику, о которой также никому не следует знать

Ну что ж, благодаря майору и об этом Москва узнает своевременно, — заметил Круклис

По легенде Политов превращался в Героя Советского Союза, кавалера орденов Красного Знамени, Александра Невского, двух орденов Красной Звезды, двух медалей «За отвагу» майора Красной армии Петра Ивановича Таврина, следующего через Москву к месту отдыха после лечения в госпитале

Но до того как им стать, был унтер-офицером старой русской армии

Периодически, раз в неделю, приобретайте билеты в Большой театр

Только сейчас старший наряда обратил внимание на фотографии и взял их в руки

Это было оговорено в тексте радиограммы, рассчитано на то, чтобы поставить центр перед необходимостью выбора, а следовательно, дополнительных запросов и оживления работы канала связи и навязать ему таким образом свою волю

И Политов сразу перепугался излишней скромностью разгневать начальство

Весь следующий день они лазили со своей кинотехникой по кольцу малой трассы, к чему-то примерялись, что-то выбирали

— Это тебе господин Вёлер объяснит, — ответил Лещук и предупредил: — А пока сиди и не вздумай дурить

И каждый раз, засыпая снова, думала о том, как и впредь надо быть осторожной

King S Casino Wiki rytp?

King S Casino Wiki rytp?

r программирование блэкджекаAuch zu dem Vorfall von Jamie Vor zwei Monaten hatte der Verein schon drei Spieler entlassen, die ebenfalls durch rassistische Äußerungen aufgefallen waren.Der Stürmer, der wegen hatte der seiner explosivebrü, unkontroller Diensten des Premier League-Vereins Leicester City. Игровые автоматы для высококлассных казино в ВегасеGrund für Eröffnung sind Schätzungen, dass rund 55.800 GBP.Sie ist die bisher einzige Einrichtung king s casino wiki rytp? ihrer Art, die sich auf die Behandlung von Minderjährigen spezialisiert hat.kings казино розвадов покерные турниры 2019

покер онлайн бесплатно без денег Doch leider hatte Vardy dieses Mal auch im Casino sein Temperament nicht unter Kontrolle. ihrer Art, die sich auf die Behandlung von Minderjährigen spezialisiert hat.de berichtet über den aktuellen Fall eines englischen Nationalspielers, der für gehörige Negativschlagzeilen sorgte, und zeigt am National Beispieles des-deuts-deutschell.казино для крупных игроков b2scom / vardy7) Poker wird immer trust, auch bei Prominenten sowie bei aktuellen und ehemaligen Sportstars. онлайн бесплатно

gta v онлайн-казино aubpahenIm Nachhinein entschuldigte sich der englische Nationalspieler für sein Verhalten.Die National Problem Gambling Clinic für Kinder wurde vom NHS im Herzt 2019 in London eröffnet.Lediglich 25% der Patienten hätten wegen des Glücksspiels keine Schulden gemacht.online casino panda gameAls dieser nicht verschwand, ging Vardy in einer sehr агрессивный Art und Weise auf den Mann zu.youtube.com/embed/cX857 imDungiepU4 King s Casino wiki rytp? den Vorfall zum Glück aufgezeichnet.prime слоты kokemuksia

King S Casino Wiki rytp? фон Имкс Dieser Artikel wurde 6802 mal getwittert und enthält 646 Benutzerkommentare.

RYTP Значение - Что означает RYTP?

RYTP , что означает, что - это русский You Tube Poot, а другая полная форма определения RYTP представлена ​​в таблице ниже. В таблице есть 1 различное значение аббревиатуры RYTP , которые являются компиляцией сокращений RYTP, таких как терминология и т. Д. Если вы не можете найти значение аббревиатуры RYTP, которую ищете в 1 другой таблице значений RYTP, выполните поиск еще раз, используя модель вопросов, например «Что означает RYTP ?, Значение RYTP», или вы можете выполнить поиск, набрав только сокращение RYTP в поле поисковая строка.
Значение аббревиатур RYTP зарегистрировано в разных терминологиях. Особенно, если вам интересно, все значения, принадлежащие акронимам RYTP в терминологии, нажмите кнопку соответствующей терминологии с правой стороны (внизу для мобильных телефонов) и перейдите к значениям RYTP, которые записаны только в этой терминологии.

Значение Astrology Queries Citation

Значение RYTP

  1. Русский You Tube Poot

Также можно найти значение RYTP в других источниках.

Что означает RYTP?

Мы составили запросы в поисковых системах о сокращении RYTP и разместили их на нашем веб-сайте, выбрав наиболее часто задаваемые вопросы.Мы думаем, что вы задали аналогичный вопрос поисковой системе, чтобы найти значение аббревиатуры RYTP, и мы уверены, что следующий список привлечет ваше внимание.

  1. Что означает RYTP?

    RYTP означает русский You Tube Poot.
  2. Что означает аббревиатура RYTP?

    Сокращение RYTP означает «Русский You Tube Poot».
  3. Что такое определение RYTP?
    RYTP определение - "Русский You Tube Poot".
  4. Что означает RYTP?
    RYTP означает, что "Русский You Tube Poot".
  5. Что такое аббревиатура RYTP?
    Акроним RYTP - «Русский You Tube Poot».
  6. Что такое сокращение от русского You Tube Poot?
    Сокращение "Russian You Tube Poot" - RYTP.
  7. Что такое аббревиатура RYTP?
    Определения сокращенного обозначения RYTP - «Русский You Tube Poot».
  8. Какова полная форма аббревиатуры RYTP?
    Полная форма аббревиатуры RYTP - «Русский You Tube Poot».
  9. В чем полное значение RYTP?
    Полное значение RYTP - «Русский You Tube Poot».
  10. Какое объяснение RYTP?
    Пояснение к RYTP - "Russian You Tube Poot".
Что означает аббревиатура RYTP в астрологии?

Мы не оставили места только значениям определений RYTP. Да, мы знаем, что ваша основная цель - объяснение аббревиатуры RYTP. Однако мы подумали, что вы можете рассмотреть астрологическую информацию об аббревиатуре RYTP в астрологии.Поэтому астрологическое описание каждого слова доступно внизу.

RYTP Аббревиатура в астрологии
  • RYTP (буква R)

    Буква R, которая идентифицируется с цифрой 9, притягивает к себе энергию. Гуманитарные аспекты перевешивают. Они за мир. Логичный ход позволит им делать меньше ошибок. У них практический интеллект, они действуют быстро. Но иногда они так много думают, что в конечном итоге изо всех сил пытаются решить.

    Агрессивность - один из первых отрицательных качеств.Но все идет быстро. Иногда они могут быть нетерпимыми. Им нравятся сильные и уважаемые люди. Для них важнее не красота, а интеллект.

  • RYTP (буква Y)

    Y - одна из последних букв алфавита, ее нумерологическое значение - 7. Она представляет тайны и тайны. Они придают большое значение своей независимости. Они не могут жить под давлением, и их нельзя ограничивать.

    Они выходят на первый план с техникой озвучивания.Их воспоминания сильны. Несмотря на то, что прошло много лет, они могут легко описать это так, как ясно, что это произошло вчера. Депрессивные аспекты перевешивают.

  • RYTP (буква T)

    Буква T Люди, находящиеся под влиянием Нептуна, известны своим мечтательным характером. Им легче жить чем-то в своем внутреннем мире. Хотя, с одной стороны, они сострадательны и чувствительны, с другой стороны, они могут быть холодными и отстраненными по отношению к незнакомым людям.

    Чувствительность вызывает быстрый перелом. Они могут быть одержимы другими словами. Их духовное направление очень развито. Время от времени их разочарования отражаются на их деловой жизни. Они довольно открыты для внешних факторов.

  • RYTP (буква P)

    Буква P Люди, полностью доверяющие себе, далеки и загадочны. Хотя они могут уловить, что происходит вокруг них, они перестают интересоваться, если это становится препятствием для их бизнеса.Иногда они могут проявлять эгоистичное поведение. Когда они говорили «мое» для чего-то, это было особенным для них самих.

    Буква, нумерологическое значение которой 7, обозначает мощность. Он хочет быть лидером в сообществе, поскольку он уверен в себе. Он выбирает свою избранницу из хороших людей, которых тоже уважает в обществе.

Цитирование RYTP

Добавьте это сокращение в свой список источников. Мы предоставляем вам несколько форматов цитирования.

  • APA 7-й
    RYTP Значение .(2019, 24 декабря). Acronym24.Com. https://acronym24.com/rytp-meaning/
    Цитата в тексте: ( RYTP Meaning , 2019)
  • Chicago 17th
    «RYTP Meaning». 2019. Acronym24.Com. 24 декабря 2019 г. https://acronym24.com/rytp-meaning/.
    Цитирование в тексте: («Значение RYTP», 2019)
  • Гарвард
    Acronym24.com. (2019). RYTP Значение . [онлайн] Доступно по адресу: https://acronym24.com/rytp-meaning/ [доступ 31 июля 2021 г.].
    Цитата в тексте: (Acronym24.com, 2019)
  • MLA 8th
    «Значение RYTP». Acronym24.Com , 24 декабря 2019 г., https://acronym24.com/rytp-meaning/. Доступ 31 июля 2021 г.
    Цитата в тексте: («Значение RYTP»)
  • AMA
    1. Значение RYTP. Acronym24.com. Опубликовано 24 декабря 2019 г. По состоянию на 31 июля 2021 г. https://acronym24.com/rytp-meaning/
    Цитата в тексте: 1
  • IEEE
    [1] «Значение RYTP», Acronym24.com , 24 декабря 2019 г.https://acronym24.com/rytp-meaning/ (по состоянию на 31 июля 2021 г.).
    Цитата в тексте: [1]
  • MHRA
    «Значение RYTP». 2019. Acronym24.Com [по состоянию на 31 июля 2021 г.]
    («Значение RYTP» 2019 г.)
  • OSCOLA
    «Значение RYTP» ( Acronym24.com , 24 декабря 2019 г.) по состоянию на 31 июля 2021 г.
    Сноска: «Значение RYTP» ( Acronym24.com , 24 декабря 2019 г.) по состоянию на 31 июля 2021 г.
  • Ванкувер
    1. Значение RyTP [Интернет]. Acronym24.com. 2019 [цитировано 31 июля 2021 года]. Доступно по адресу: https://acronym24.com/rytp-meaning/
    Цитата в тексте: (1)

Совместимость по связыванию ДНК белков SsbA и SsbB Streptococcus pneumoniae

Аннотация

Фон

Streptococcus pneumoniae содержит два паралогичных гомотетрамерных белка связывания одноцепочечной ДНК (SSB), обозначенных как SsbA и SsbB.Предыдущие исследования продемонстрировали, что SsbA и SsbB имеют разные предпочтения в зависимости от раствора в способе связывания с различной способностью связывания ДНК. Было исследовано влияние этих различных связывающих свойств на сборку множества SsbA и SsbB на одноцепочечной ДНК.

Методология / основные выводы

Комплексы, образованные белками SsbA и SsbB на олигомерах dT n определенной длины, исследовали электрофорезом в полиакриламидном геле.Комплексы, содержащие либо два SsbAs, либо два SsbB, либо смешанные комплексы, содержащие один SsbA и один SsbB, могли быть легко образованы при условии, что олигомер dT n был достаточно длинным, чтобы удовлетворить полную способность режима связывания каждого из связанных белков при частные условия решения. Комплексы, содержащие два SsbA или два SsbB, также могут быть образованы на более коротких олигомерах dT n посредством механизма «связывания с общей цепью», в котором один или оба белка связываются с использованием только части их потенциальной связывающей способности.Однако смешанные комплексы не образовывались на этих более коротких олигомерах, что указывает на несовместимость SsbA и SsbB для связывания с общей цепью. Дополнительные эксперименты показали, что эта несовместимость связывания с общей цепью может быть частично обусловлена ​​различиями в структуре области петли на внешней поверхности субъединиц белков SsbA и SsbB.

Заключение / Значение

Эти результаты показывают, что белки SsbA и SsbB могут совместно собираться на более длинных сегментах ДНК, где возможно независимое связывание, но не на более коротких сегментах ДНК, где требуются скоординированные взаимодействия между соседними SSB.Очевидное требование совместимости для связывания с общей цепью может предположительно служить механизмом самопознания, который регулирует способ, которым взаимодействуют SsbA и SsbB в S. pneumoniae .

Образец цитирования: Salerno B, Anne G, Bryant FR (2011) Совместимость связывания ДНК белков SsbA и SsbB Streptococcus pneumoniae Streptococcus pneumoniae. PLoS ONE 6 (9): e24305. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305

Редактор: Владимир Н.Уверский, Медицинский колледж Университета Южной Флориды, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 15 июля 2011 г .; Принята к печати: 4 августа 2011 г .; Опубликовано: 7 сентября 2011 г.

Авторские права: © 2011 Salerno et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа финансировалась за счет средств Школы общественного здравоохранения Блумберга Университета Джонса Хопкинса. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Естественно трансформируемая грамположительная бактерия Streptococcus pneumoniae имеет два паралогичных гомотетрамерных белка связывания одноцепочечной ДНК (SSB), обозначенных SsbA и SsbB (Рисунок 1) [1] - [3].Белок SsbA (156 аминокислот / 17 350 Да на мономер) экспрессируется конститутивно, тогда как белок SsbB (131 аминокислота / 14 926 Да на мономер) индуцируется специфически во время трансформационной компетентности. Эти паттерны экспрессии предполагают, что белок SsbA может служить общим белком SSB для рутинных функций ДНК, и что белок SsbB может быть специализированным белком SSB, используемым в основном во время естественной трансформации [1].

Рисунок 1. Streptococcus pneumoniae Белки SsbA и SsbB.

Аминокислотные последовательности белков S. pneumoniae SsbA и SsbB выровнены с аминокислотными последовательностями белка SSB E. coli , SsbEc. Идентичные остатки выделены черным. Разделение между N-концевым и C-концевым доменами указано стрелкой, а предполагаемая область петли 1 обозначена рамкой.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g001

Последовательность N-концевых доменов белков SsbA и SsbB (аминокислоты 1–105 / 106) сходна.С-концевой домен белка SsbB (аминокислоты 106–131), однако, значительно короче, чем у белка SsbA (аминокислоты 107–156) (Рисунок 1). Структурные исследования соответствующих участков гомотетрамерного белка SSB из Escherichia coli (SsbEc) и других бактериальных белков SSB показали, что N-концевой домен содержит сайты связывания ДНК и тетрамеризации субъединицы, тогда как C-концевой домен может служить в качестве сайт связывания для других белков, участвующих в различных функциях ДНК [4].

Бактериальные белки SSB связывают одноцепочечную ДНК неспецифическим образом. Свойства связывания ДНК белка SsbEc были охарактеризованы наиболее полно. Были идентифицированы два основных режима привязки: режим SSB 35 и режим SSB 65 . В режиме SSB 35 (предпочтительнее при более низких концентрациях соли) две субъединицы тетрамера SsbEc взаимодействуют с одноцепочечной ДНК (перекрывая ~ 35 нуклеотидов на тетрамер), тогда как в режиме SSB 65 (предпочтительнее при более высоких концентрациях соли). концентрации), все четыре субъединицы тетрамера SsbEc взаимодействуют с одноцепочечной ДНК (окклюзируя ~ 65 нуклеотидов на тетрамер) [5].

Ранее мы провели сравнительный анализ свойств режима связывания ДНК белков SsbEc, SsbA и SsbB. В этом исследовании различные белки SSB инкубировали с олигомером, dT 35 , в различных условиях раствора, и полученные комплексы исследовали электрофорезом в полиакриламидном геле. В стандартном реакционном растворе (25 мМ трис-ацетат (pH 7,5)) белок SsbEc был способен связывать единственную молекулу dT 35 , что соответствует режиму связывания SSB 35 .Однако, когда Mg 2+ (10 мМ) был включен в реакционный раствор, белок SsbEc был способен связывать две молекулы dT 35 , что соответствует режиму связывания SSB 65 . Белок SsbA вел себя аналогично белку SsbEc во всех условиях реакции, указывая на то, что он взаимодействовал с dT 35 в режимах SSB 35 и SSB 65 , которые были аналогичны таковым для белка SsbEc. Белок SsbB, напротив, связывал две молекулы dT 35 в режиме, подобном SSB 65 в отсутствие Mg 2+ , и в усиленном режиме, подобном SSB 65 (с положительной межсубъединицей). кооперативность) в присутствии Mg 2+ [2].

Явная разница в предпочтениях режима связывания поднимает вопрос, могут ли SsbA и SsbB взаимодействовать вместе на одноцепочечной ДНК. Чтобы решить эту проблему, мы исследовали сборку нескольких SsbA или SsbB на олигомерах dT n различной определенной длины. Электрофорез в полиакриламидном геле особенно хорошо подходит для этого анализа, потому что различные комплексы SSB · dT n легко разрешимы и в высшей степени стабильны во время электрофореза, а влияние условий раствора на образование комплексов можно оценить, варьируя состав электрофореза. рабочий буфер.Результаты показывают, что: i) для белков SsbA и SsbB доступны разные механизмы сборки, в зависимости от длины ДНК и конкретных условий раствора, и ii) SsbA и SsbB могут совместно собираться на более длинных сегментах ДНК, где происходит независимое связывание. возможно, но не на более коротких сегментах ДНК, где требуются скоординированные взаимодействия между соседними SSB.

Результаты

Опытный образец

Было исследовано связывание белков SsbA и SsbB Streptococcus pneumoniae, , с набором олигомеров dT n с длиной от dT 50 до dT 130 .Особое внимание было уделено определению самого короткого олигомера dT n , который был способен приспособиться к связыванию двух SsbAs, двух SsbB или одного SsbA и одного SsbB в отсутствие или в присутствии Mg 2+ . При таком подходе ожидалось, что два SSB должны будут взаимодействовать скоординированным образом, чтобы сформировать комплекс с минимальной длиной dT n , тогда как SSB могли бы независимо связываться с изолированными сайтами на более длинных dT n. олигомеров.Все реакции связывания проводили в растворах, содержащих 25 мМ трис ацетата (pH 7,5) и 0 или 10 мМ ацетата магния, и полученные комплексы анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием рабочего буфера, идентичного составу индивидуальных реакционных растворов. .

Сборка белка SsbA

Комплексы, которые были образованы белком SsbA с различными олигомерами dT n в отсутствие и в присутствии Mg 2+ , показаны на рисунках 2 и 3 соответственно ( примечание : в этих экспериментах Электрофоретическая подвижность свободных олигомеров dT n демонстрирует большую обратную зависимость от длины, чем соответствующие комплексы SsbA · dT n , что приводит к постепенному уменьшению разделения между свободными dT n олигомеров и комплексов SsbA · dT n с увеличением длины dT ( n ).

Фигура 2. Связывание белка SsbA с олигомерами dT n в отсутствие Mg 2+ .

Реакционные растворы содержали 25 мМ трис ацетата (pH 7,5), 5 мкМ dT n (концентрация нуклеотидов) и указанные концентрации белка SsbA (концентрации тетрамера). Реакции анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием гелевого рабочего буфера, состоящего из трис ацетата (pH 7,5). Полосы, соответствующие несвязанным олигомерам dT n и комплексам A 1 , A 2 и A 3 , были визуализированы с помощью фосфорного изображения.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g002

Рисунок 3. Связывание белка SsbA с олигомерами dT n в присутствии Mg 2+ .

Реакционные растворы содержали 25 мМ трис ацетата (pH 7,5), 10 мМ ацетата магния, 5 мкМ dT n (концентрация нуклеотидов) и указанные концентрации белка SsbA (концентрации тетрамера). Реакции анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием гелевого рабочего буфера, состоящего из трис ацетата (pH 7.5) и 10 мМ ацетата магния. Полосы, соответствующие несвязанным олигомерам dT n и комплексам A 1 и A 2 , были визуализированы с помощью фосфорного изображения.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g003

Отсутствие магния
2+ .

При добавлении возрастающих концентраций SsbA к dT 50 в отсутствие Mg 2+ образовался единый комплекс с подвижностью геля ниже, чем у несвязанного dT 50 (комплекс A 1 ) .Весь dT 50 был преобразован в этот комплекс при концентрации SsbA, которая соответствовала приблизительно одному тетрамеру SsbA на молекулу dT 50 , и не было никаких указаний на образование второго комплекса при более высоких концентрациях SsbA (рис. дополнительные данные не показаны). Аналогичный образец связывания был получен с более длинным олигомером, dT 65 (гель не показан). Эти результаты показали, что один SsbA способен связываться с dT 50 и dT 65 в этих условиях реакции.

Когда длина олигомера была увеличена до dT 75 , с увеличением концентрации SsbA образовался комплекс A 1 , аналогично тому, как это наблюдается с более короткими олигомерами. Однако при дальнейшем увеличении концентрации SsbA комплекс A 1 исчез и образовался новый комплекс с еще более низкой подвижностью геля (комплекс A 2 ). Этот результат показал, что второй SsbA был способен связываться с dT 75 в этих условиях.Аналогичный образец связывания наблюдался с более длинными олигомерами, dT 85 , dT 90 и dT 100 , что указывает на то, что два SsbA также были способны связываться с каждым из этих олигомеров (Рисунок 2).

Когда длина олигомера была увеличена до dT 130 , комплексы A 1 и A 2 образовывались с увеличением концентрации SsbA аналогично тому, как это наблюдалось с dT 100 . Однако при более высоких концентрациях SsbA образовывался третий комплекс с более низкой подвижностью, чем комплексы A 1 и A 2 (комплекс A 3 ).Этот результат показал, что три SsbA были способны связываться с dT , 130, в этих условиях (рис. 2).

Результаты на рисунке 2 показали, что самый короткий олигомер dT n в наборе, который был способен связывать два SsbA в отсутствие Mg 2+ , был dT 75 , а самый короткий олигомер dT n , способный связывать три SsbA, был dT 130 . Эти результаты приведены в таблице 1.

Наличие магния
2+ .

При добавлении возрастающих концентраций SsbA к dT 50 в присутствии Mg 2+ образовался единый комплекс с подвижностью геля ниже, чем у несвязанного dT 50 (комплекс A 1 ) , без указания на образование второго комплекса при более высоких концентрациях SsbA (рис. 3). Аналогичный образец связывания был получен с dT 65 (гель не показан). Эти результаты были аналогичны тем, которые были получены в отсутствие Mg 2+ , и показали, что один SsbA был способен связываться с dT 50 и dT 65 в присутствии Mg 2+ .Комплексы 1 также образовывались при добавлении возрастающих концентраций SsbA к более длинным олигомерам, dT 75 и dT 85 , но в отличие от результатов, которые были получены в отсутствие Mg 2+ , A 2 комплексов не были обнаружены с этими олигомерами (рис. 3).

Когда длина олигомера была увеличена до dT 90 , при более низких концентрациях SsbA образовался комплекс A 1 , аналогично тому, как это наблюдается с более короткими олигомерами.Однако при дальнейшем увеличении концентрации SsbA комплекс A 1 исчез и образовался новый комплекс с еще более низкой подвижностью геля (комплекс A 2 ). Этот результат показал, что второй SsbA был способен связываться с dT 90 в этих условиях. Аналогичный образец связывания был получен с dT 100 и dT 130 , что указывает на то, что два SsbA также способны связываться с каждым из этих олигомеров. Однако в отличие от результатов, которые были получены в отсутствие Mg 2+ , не было никаких указаний на образование третьего комплекса с dT 130 , даже при самых высоких концентрациях SsbA, которые были исследованы (Рисунок 3 ).

Результаты на Фигуре 3 показали, что самый короткий олигомер dT n в наборе, который был способен связывать два SsbA в присутствии Mg 2+ , был dT 90 , и что только два SsbA были способны связывать связываются даже при увеличении длины олигомера до dT 130 . Эти результаты приведены в таблице 1.

Сборка белка SsbB

Комплексы, которые были образованы белком SsbB с различными олигомерами dT n в отсутствие и в присутствии Mg 2+ , показаны на рисунках 4 и 5, соответственно ( примечание : в этих экспериментах разделение свободных олигомеров dT n и различных комплексов SsbB · dT n меньше, чем наблюдаемое с белком SsbA, из-за меньшего размера молекулы белка SsbB и повышенной электрофоретической подвижности СсбБ · дТ н комплексов).

Фигура 4. Связывание белка SsbB с олигомерами dT n в отсутствие Mg 2+ .

Реакционные растворы содержали 25 мМ трис ацетата (pH 7,5), 5 мкМ dT n (концентрация нуклеотидов) и указанные концентрации белка SsbB (концентрации тетрамера). Реакции анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием гелевого рабочего буфера, состоящего из трис ацетата (pH 7,5). Полосы, соответствующие несвязанным олигомерам dT n и комплексам B 1 и B 2 , визуализировали с помощью фосфорного изображения.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g004

Рисунок 5. Связывание белка SsbB с олигомерами dT n в присутствии Mg 2+ .

Реакционные растворы содержали 25 мМ трис ацетата (pH 7,5), 10 мМ ацетата магния, 5 мкМ dT n (концентрация нуклеотидов) и указанные концентрации белка SsbB (концентрации тетрамера). Реакции анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием гелевого рабочего буфера, состоящего из трис ацетата (pH 7.5) и 10 мМ ацетата магния. Полосы, соответствующие несвязанным олигомерам dT n и комплексам B 1 и B 2 , визуализировали с помощью фосфорного изображения.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g005

Отсутствие магния
2+ .

При добавлении возрастающих концентраций SsbB к dT 50 в отсутствие Mg 2+ образовался единый комплекс с подвижностью геля ниже, чем у несвязанного dT 50 (комплекс B 1 ) .Весь dT 50 был преобразован в этот комплекс при концентрации SsbB, которая соответствовала приблизительно одному тетрамеру SsbB на молекулу dT 50 , и не было никаких указаний на образование второго комплекса при более высоких концентрациях SsbB (рис. дополнительные данные не показаны). Аналогичный образец связывания был получен с более длинными олигомерами, dT 65 (гель не показан) и dT 75 (Фиг.4). Эти результаты показали, что только один SsbB способен связываться с этими олигомерами в этих условиях.

Когда длина олигомера была увеличена до dT 85 , при более низких концентрациях SsbB образовался комплекс B 1 , аналогично тому, как это наблюдается с более короткими олигомерами. Однако при дальнейшем увеличении концентрации SsbB комплекс B 1 исчез и образовался новый комплекс с еще более низкой подвижностью геля (комплекс B 2 ). Этот результат показал, что второй SsbB был способен связываться с dT 85 в этих условиях (фигура 4).Аналогичный образец связывания наблюдали с более длинными олигомерами, dT 90 , dT 100 и dT 130 , что указывает на то, что два SsbB также способны связываться с каждым из этих олигомеров. Однако не было никаких указаний на образование третьего комплекса с этими олигомерами даже при самых высоких концентрациях SsbB, которые были исследованы (рис. 4).

Результаты на Фигуре 4 показали, что самый короткий олигомер dT n в наборе, который был способен связывать два SsbB в отсутствие Mg 2+ , был dT 85 , и что только два SsbB были способны связывать связываются даже при увеличении длины олигомера до dT 130 .Эти результаты приведены в таблице 1.

Наличие магния
2+ .

При добавлении возрастающих концентраций SsbB к dT 50 в присутствии Mg 2+ образовался единый комплекс с подвижностью геля ниже, чем у несвязанного dT 50 (комплекс B 1 ) , без указания на образование второго комплекса при более высоких концентрациях SsbB (рис. 5). Аналогичный образец связывания был получен с более длинными олигомерами, dT 65 (гель не показан) и dT 75 (Фиг.5).Эти результаты были аналогичны тем, которые были получены в отсутствие Mg 2+ , и показали, что только один SsbB был способен связываться с этими олигомерами в этих условиях. Комплексы B 1 также образовывались при добавлении возрастающих концентраций SsbB к более длинным олигомерам, dT 85 и dT 90 , но в отличие от результатов, которые были получены в отсутствие Mg 2+ , B 2 комплексов не были обнаружены с этими олигомерами (рис. 5).

Когда длина олигомера была увеличена до dT 100 , при более низких концентрациях SsbB образовался комплекс B 1 , аналогично тому, как это наблюдается с более короткими олигомерами. Однако при дальнейшем увеличении концентрации SsbB комплекс B 1 исчез и образовался новый комплекс с еще более низкой подвижностью геля (комплекс B 2 ). Этот результат показал, что второй SsbB был способен связываться с dT 100 в этих условиях (Фиг.5).Аналогичный образец связывания был получен с dT 130 , что указывает на то, что два SsbB также способны связываться с этим олигомером. Однако не было никаких указаний на образование третьего комплекса с этими олигомерами даже при самых высоких концентрациях SsbB, которые были исследованы (рис. 5).

Результаты на Фигуре 5 показали, что самый короткий олигомер dT n в наборе, который был способен связывать два SsbB в присутствии Mg 2+ , был dT 100 , и что только два SsbB были способны связывать связываются даже при увеличении длины олигомера до dT 130 .Эти результаты приведены в таблице 1.

Совместная сборка белков SsbA и SsbB

Также была исследована способность белков SsbA и SsbB совместно собираться на олигомерах dT n . Для этих экспериментов были выбраны олигомеры dT n , которые были достаточно длинными, чтобы приспособиться к связыванию либо двух SsbAs, либо двух SsbB в различных условиях раствора (см. Таблицу 1).

Отсутствие магния
2 .

Первая серия экспериментов по совместной сборке в отсутствие Mg 2+ была проведена с dT 90 (рис. 6).Когда избыточная концентрация только SsbA была добавлена ​​к dT 90 , образовался комплекс A 2 с двумя SsbA, связанными с dT 90 . Аналогично, когда избыточная концентрация одного SsbB была добавлена ​​к dT 90 , образовался комплекс B 2 с двумя SsbB, связанными с dT 90 . Однако, когда SsbA и SsbB были добавлены вместе к dT 90 , снова образовались комплексы A 2 и B 2 , но почти не было смешанных комплексов с одним SsbA и одним SsbB, связанными с одним и тем же dT 90 . молекулы (о чем судили по отсутствию новой полосы с подвижностью, промежуточной между подвижностью комплексов A 2 и B 2 ).Эти результаты показали, что хотя либо два SsbA, либо два SsbB могли связываться с dT 90 в отсутствие Mg 2+ , связывание одного SsbA и одного SsbB с dT 90 было неблагоприятным в этих условиях.

Фигура 6. Связывание белков SsbA и SsbB с dT 90 и dT 100 в отсутствие Mg 2+ .

Реакционные растворы содержали 25 мМ трис ацетата (pH 7,5), 5 мкМ dT 90 ( слева, ) или dT 100 ( справа, ) (общая концентрация нуклеотидов) и указанные концентрации SsbA и SsbB. белок (концентрации тетрамера). A, Реакции анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием гелевого буфера, состоящего из трис ацетата (pH 7,5). Полосы, соответствующие несвязанным олигомерам dT n и комплексам A 2 , B 2 и A · B, были визуализированы с помощью фосфорного изображения. B, Дорожки для реакций, которые содержали 0,15 мкМ SsbA, 0,15 мкМ SsbB и либо dT 90 ( слева, ), либо dT 100 ( справа, ), сканировали, чтобы показать относительную интенсивность полос для указанных комплексов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g006

Вторую серию экспериментов по совместной сборке проводили в отсутствие Mg 2+ с более длинным олигомером, dT 100 (рис. 6). Когда к dT 100 добавлялась избыточная концентрация либо SsbA, либо только SsbB, образовывались соответствующие комплексы A 2 или B 2 , как и в случае dT 90 . Однако, в отличие от результатов, полученных с dT 90 , комплексы A 2 и B 2 и третий комплекс с промежуточной подвижностью были образованы, когда SsbA и SsbB были добавлены вместе к dT 100 .Промежуточную полосу вырезали из геля, анализировали электрофорезом в SDS-полиакриламидном геле, и было обнаружено, что она содержит примерно равные количества белка SsbA и SsbB (гель не показан). Эти результаты показали, что промежуточная полоса соответствует смешанному комплексу, в котором один SsbA и один SsbB связаны с dT 100 (комплекс A · B).

Результаты на Фигуре 6 показали, что, хотя одновременное связывание SsbA и SsbB с dT 90 было неблагоприятным в отсутствие Mg 2+ , SsbA и SsbB были способны связываться вместе на dT 100 в этих условиях.

Наличие магния
2+ .

Первая серия экспериментов по совместной сборке в присутствии Mg 2+ (10 мМ) была проведена с dT 100 (рис. 7). Когда избыточная концентрация либо SsbA, либо только SsbB добавлялась к dT 100 , соответствующие комплексы A 2 и B 2 образовывались, как ожидалось. Однако, когда SsbA и SsbB были добавлены вместе к dT 100 , снова образовались комплексы A 2 и B 2 , но не было смешанных комплексов с одним SsbA и одним SsbB, связанными с одной и той же молекулой dT 100 . обнаружены (о чем судят по отсутствию новой полосы с промежуточной подвижностью между комплексами A 2 и B 2 ).Эти результаты показали, что хотя два SsbA или два SsbB могут связываться с dT 100 в присутствии Mg 2+ , связывание одного SsbA и одного SsbB с dT 100 было неблагоприятным в этих условиях.

Фигура 7. Связывание белков SsbA и SsbB с dT 100 и dT 130 в присутствии Mg 2+ .

Реакционные растворы содержали 25 мМ трис-ацетата (pH 7,5), 10 мМ ацетата магния, 5 мкМ dT 100 ( слева, ) или dT 130 ( справа, ) (общая концентрация нуклеотидов) и указанные концентрации белка SsbA и SsbB (концентрации тетрамера). A, Реакции анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием гелевого рабочего буфера, состоящего из трис ацетата (pH 7,5) и 10 мМ ацетата магния. Полосы, соответствующие несвязанным олигомерам dT n и комплексам A 2 , B 2 и A · B, были визуализированы с помощью фосфорного изображения. B, Дорожки для реакций, которые содержали 0,15 мкМ SsbA, 0,15 мкМ SsbB и либо dT 100 ( слева, ), либо dT 130 ( справа, ), сканировали, чтобы показать относительную интенсивность полос для указанных комплексов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g007

Вторую серию экспериментов по совместной сборке проводили в присутствии Mg 2+ с более длинным олигомером, dT 130 (рис. 7). Когда к dT 130 добавлялась избыточная концентрация либо SsbA, либо только SsbB, образовывались соответствующие комплексы A 2 или B 2 , как и в случае dT 100 . Однако, в отличие от результатов, полученных с dT 100 , комплексы A 2 и B 2 , а также третий комплекс с промежуточной подвижностью были образованы, когда SsbA и SsbB были добавлены вместе к dT 100 .Появление промежуточной полосы соответствовало образованию смешанного комплекса, в котором один SsbA и один SsbB были связаны с dT 130 (комплекс A · B).

Результаты на Фигуре 7 показали, что, хотя одновременное связывание SsbA и SsbB с dT 100 было неблагоприятным в присутствии Mg 2+ , SsbA и SsbB были способны связываться вместе на dT , 130, в этих условиях.

Совместная сборка белка SsbA с белками SsbA / B и SsbB

RYTP белками

Дополнительные эксперименты по совместной сборке были проведены с белком SsbA и двумя вариантами SSB: белком SsbA / B и белком SsbB RYTP .Белок SsbA / B представляет собой химерный белок, в котором С-концевой домен белка SsbA (аминокислоты 106–156) заменен на С-концевой домен белка SsbB (аминокислоты 105–131) [2]. . Белок SsbB RYTP представляет собой модифицированный белок SsbB, в котором последовательность из четырех аминокислот из N-концевого домена белка SsbB ( 18 HKTN 21 ) заменена соответствующей последовательностью из белка SsbA ( 18 RYTP 21 ) (Рисунок 1, Материалы и методы).Белок SsbA / B (15039 Да на мономер) и белок SsbB RYTP (14963 Да на мономер) аналогичны по размеру белку SsbB (14926 Да на мономер) и образуют комплексы на dT 90 , которые четко видны. разрешается гель-электрофорезом из комплексов, образованных белком SsbA (17 350 Да на мономер). Эксперименты, аналогичные проведенным для белков SsbA и SsbB, показали, что либо два SsbA / Bs ((A / B) 2 комплекс), либо два SsbB RYTP s (комплекс B RYTP 2 ) были способны к связываются с dT 90 в отсутствие Mg 2+ .

Белок SsbA / B.

Первоначальный набор экспериментов по совместной сборке SsbA и SsbA / B проводился с dT 90 в отсутствие Mg 2+ (рис. 8). Когда избыточная концентрация либо SsbA, либо только SsbA / B добавлялась к dT 90 , как и ожидалось, образовывались соответствующие комплексы A 2 и (A / B) 2 . Однако, когда SsbA и SsbA / B были добавлены вместе к dT 90 , образовались комплексы A 2 и (A / B) 2 и третий комплекс с промежуточной подвижностью.Появление промежуточной полосы соответствовало образованию смешанного комплекса, в котором один SsbA и один SsbA / B были связаны с dT 90 (комплекс A · A / B).

Рисунок 8. Связывание белков SsbA и SsbA / B с dT 90 .

Реакционные растворы содержали 25 мМ трис ацетата (pH 7,5), 5 мкМ dT 90 (общая концентрация нуклеотидов) и указанные концентрации белка SsbA и SsbA / B (концентрации тетрамера). A, Реакции анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием гелевого буфера, состоящего из трис ацетата (pH 7.5). Полосы, соответствующие несвязанному олигомеру dT 90 и комплексам A 2 , (A / B) 2 и A · A / B, визуализировали с помощью фосфорного изображения. B, Дорожку для реакции, которая содержала 0,15 мкМ SsbA и 0,10 мкМ SsbA / B, сканировали, чтобы показать относительные интенсивности полос для указанных комплексов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g008

Эти результаты показали, что, хотя одновременное связывание SsbA и SsbB было неблагоприятным (Рисунок 6), SsbA был способен образовывать смешанный комплекс с SsbA / B. на dT 90 в отсутствие Mg 2+ (Фиг.8).Дополнительные эксперименты показали, что SsbA / B также отличается от SsbB тем, что он способен образовывать смешанный комплекс с SsbA на dT 100 в присутствии Mg 2+ (гель не показан).

Белок SsbB
RYTP .

Первоначальный набор экспериментов по совместной сборке SsbA и SsbB RYTP также был проведен с dT 90 в отсутствие Mg 2+ (рис. 9). Когда избыточная концентрация либо SsbA, либо только SsbB RYTP была добавлена ​​к dT 90 , как и ожидалось, образовались соответствующие комплексы A 2 и B RYTP 2 .Однако, когда SsbA и SsbB RYTP были добавлены вместе к dT 90 , образовались комплексы A 2 и B RYTP 2 и третий комплекс с промежуточной подвижностью. Появление промежуточной полосы соответствовало образованию смешанного комплекса, в котором один SsbA и один SsbB RYTP были связаны с dT 90 (комплекс A · B RYTP ).

Фигура 9. Связывание белков SsbA и SsbB RYTP с dT 90 .

Реакционные растворы содержали 25 мМ трис ацетата (pH 7,5), 5 мкМ dT 90 (общая концентрация нуклеотидов) и указанные концентрации белка SsbA и SsbB RYTP (концентрации тетрамера). A, Реакции анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием гелевого буфера, состоящего из трис ацетата (pH 7,5). Полосы, соответствующие несвязанному олигомеру dT 90 и комплексам A 2 , B RYTP 2 и A • B RYTP , были визуализированы с помощью фосфорного изображения. B, Дорожку для реакции, которая содержала 0,15 мкМ SsbA и 0,15 мкМ SsbB RYTP , сканировали, чтобы показать относительные интенсивности полос для указанных комплексов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g009

Эти результаты показали, что, хотя одновременное связывание SsbA и SsbB было неблагоприятным (Рисунок 6), SsbA смог образовать смешанный комплекс с SsbB RYTP. на dT 90 в отсутствие Mg 2+ (Фиг.9).Однако дополнительные эксперименты показали, что SsbB RYTP , как и SsbB, неспособен образовывать смешанный комплекс с SsbA на dT 100 в присутствии Mg 2+ (гель не показан).

Обсуждение

Результаты, представленные здесь, показывают, что самый короткий олигомер dT n , который способен приспосабливать связывание двух SsbA или двух SsbB, строго определен и зависит от того, включен ли Mg 2+ в реакцию. раствор (таблица 1).Это открытие предполагает, что минимальная длина олигомера может определяться предпочтительными способами связывания и потенциальной связывающей способностью отдельных белков SSB в конкретных условиях раствора.

Сборка белка SsbA

Самый короткий олигомер dT n , который был способен связывать два SsbA в отсутствие Mg 2+ , был dT 75 (таблица 1). Предполагая, что SsbA взаимодействует с олигомерами dT n в качестве тетрамера в SSB 35 -подобном режиме в отсутствие Mg 2+ (см. Введение), два SsbA могут собираться на dT 75 в этих условиях. способом, которым каждый из SsbAs взаимодействует с ~ 35-нуклеотидным сегментом олигомера.Наблюдение, что только два SsbA были способны связываться даже при увеличении длины олигомера до dT 100 , тогда как три SsbA были способны связываться с dT 130 , указывает на то, что по крайней мере ∼35 нуклеотидный сегмент dT n требовалось для стабильного связывания каждого SsbA (таблица 1). Во всех случаях по мере увеличения концентрации SsbA комплекс dT n с меньшим количеством связанных SsbAs полностью заменялся комплексом с большим количеством связанных SsbAs.Эти результаты показывают, что в условиях режима связывания, подобного SSB 35 , отдельные SsbA могут организовываться так, чтобы максимизировать количество SsbAs, связанных с олигомером dT n , при удовлетворении потребности в связывании ∼35 нуклеотидов для каждого связанного SsbA.

Более длинный олигомер dT n требовался для связывания двух SsbA, когда Mg 2+ был включен в реакционный раствор (таблица 1). Предполагая, что SsbA взаимодействует с олигомерами dT n в качестве тетрамера в SSB 65 -подобном режиме связывания в присутствии Mg 2+ (см. Введение), вероятно, что потребность в увеличенной длине связана с более высокая связывающая способность SsbA в этих условиях.Комплексы, содержащие два SsbAs, которые наблюдались с dT , 130, , согласуются с SSB 65 -подобным способом связывания в том, что dT 130 является достаточно длинным, чтобы удовлетворить полную емкость ∼65 нуклеотидов, ожидаемую для каждого из связанных SsbAs (всего около 130 нуклеотидов) (рис. 10). Однако в этих условиях стабильные комплексы, содержащие два SsbAs, также могут образовываться на олигомерах длиной dT 90 (Таблица 1). С этими более короткими олигомерами один или оба SsbA предположительно были связаны с использованием только части их потенциальной связывающей способности.Эти результаты предполагают, что в условиях режима связывания, подобного SSB 65 , два SsbA способны собираться на более короткие сегменты одноцепочечной ДНК посредством скоординированного разделения цепи ДНК между связанными белками.

Рисунок 10. Независимые связывающие комплексы ДНК с общей цепью.

Первый комплекс представляет собой независимый связывающий комплекс , в котором каждый из двух тетрамеров SSB связан с 65-нуклеотидным сегментом молекулы dT 130 .Второй комплекс представляет собой -связывающий с общей цепью комплекс , в котором один тетрамер SSB связан с 65-нуклеотидным сегментом, а второй тетрамер SSB связан с оставшимся 25-нуклеотидным сегментом молекулы dT 90 ( неравное совместное использование ). Третий комплекс представляет собой связывающий с общей цепью комплекс , в котором каждый из двух тетрамеров SSB связан с 45-нуклеотидным сегментом молекулы dT 90 ( с равным общим ). Пути, показанные для цепей dT n в этих комплексах, являются предположительными и основаны на структурной модели белка SsbEc, связанного с одноцепочечной ДНК в режиме связывания SSB 65 [7].

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g010

Для нити ДНК можно предусмотреть различные схемы в механизме «связывания с общей нитью» (рис. 10). Например, с dT 90 один SsbA может быть связан с сегментом из 65 нуклеотидов, а второй SsbA может быть связан с оставшимся сегментом из 25 нуклеотидов олигомера. Альтернативно, dT , 90, может быть более равномерно распределен между двумя SsbA, при этом каждый из них связывается с сегментом из 45 нуклеотидов олигомера.Эти возможности не обязательно являются взаимоисключающими, и также может иметь место комбинация различных обязательных механизмов. В любом случае, наблюдение, что комплексы с двумя SsbA не образовывались на олигомерах dT n короче, чем dT 90 , когда Mg 2+ был включен в реакционный раствор, но могли образовываться на олигомерах такой длины, как dT 75 в отсутствие Mg 2+ (таблица 1) предполагает, что расположение общих цепей, которое принимается, когда два SsbAs связываются в SSB 65 -подобном режиме, может отличаться от расположения связывания, которое используется, когда два SsbA связываются в режиме, подобном SSB 35 .

Сборка белка SsbB

Более длинные олигомеры dT n требовались для связывания двух SsbB, чем были необходимы для двух SsbA, как в отсутствие, так и в присутствии Mg 2+ (Таблица 1). Предполагая, что SsbB взаимодействует с олигомерами dT n в качестве тетрамера в SSB 65 -подобном режиме в отсутствие Mg 2+ и в усиленном SSB 65 -подобном режиме в присутствии Mg 2+ (см. Введение), требование большей длины может отражать более высокую связывающую способность SsbB по сравнению с SsbA в этих условиях реакции.Комплексы, содержащие два SsbB, которые наблюдались с dT 130 как в отсутствие, так и в присутствии Mg 2+ , согласуются либо с SSB 65 -подобным режимом, либо с усиленным SSB 65 -подобным режимом связывания в что dT 130 достаточно длинный, чтобы удовлетворить полную ∼65 нуклеотидную связывающую способность, ожидаемую для каждого из связанных SsbB в любом случае (всего ∼130 нуклеотидов) (Фиг.10). Однако стабильные комплексы, содержащие два SsbB, также могут образовываться на таких коротких олигомерах, как dT 85 (в отсутствие Mg 2+ ) или dT 100 (в присутствии Mg 2+ ).Эти результаты предполагают, что два SsbB могут связываться с более короткими олигомерами с использованием механизма связывания с общей цепью, аналогичного предложенному для SsbA в присутствии Mg 2+ (условия режима связывания, подобные SSB 65 ) (Фиг.10). В случае SsbB наблюдение, что dT 85 способно приспособиться к связыванию двух SsbB в отсутствие Mg 2+ , тогда как по крайней мере dT 100 требовалось для связывания двух SsbB в присутствии Mg 2+ может отражать разницу в расположении общей цепи между двумя SsbB в нормальных условиях связывания в режиме, подобном SSB 65 , по сравнению с усиленным режимом связывания, подобным SSB 65 .

Совместная сборка белков SsbA и SsbB

Самый короткий олигомер dT n , который был способен поддерживать одновременное связывание одного SsbA и одного SsbB, также был строго определен и зависел от условий раствора.

В отсутствие Mg 2+ комплексы, содержащие либо два SsbAs, либо два SsbB, легко образовывались на dT 90 . Однако при добавлении обоих белков к dT 90 было обнаружено небольшое количество смешанных комплексов с одним SsbA и одним SsbB или вовсе их не было (фигура 6).Если предположить, что связывающая способность SsbA в этих условиях составляет ~ 35 нуклеотидов (SSB 35 -подобный режим), а связывающая способность SsbB принимается равной ~ 65 нуклеотидов (SSB 65 -подобный режим), то dT 90 молекулы не будет достаточно длинной, чтобы удовлетворить полную связывающую способность одного SsbA и одного SsbB (всего ~ 100 нуклеотидов). Следовательно, одновременное связывание SsbA и SsbB с dT 90 предположительно потребовало бы связывания одного или обоих этих белков с использованием только части их потенциальной связывающей способности.Отсутствие образования смешанного комплекса на dT 90 , таким образом, предполагает, что SsbA и SsbB не способны участвовать в связывании с общей цепью в отсутствие Mg 2+ .

Очевидная несовместимость в связывании с общей цепью, по-видимому, не препятствует независимому связыванию SsbA и SsbB с более длинными олигомерами dT n , где совместное использование цепей не требуется. Хотя они были неспособны совместно собираться на dT 90 , SsbA и SsbB были способны образовывать смешанный комплекс на dT 100 в отсутствие Mg 2+ (Фиг.6).В этом случае молекула dT 100 может потенциально обеспечивать ∼35-нуклеотидный сегмент для SsbA и ∼65-нуклеотидный сегмент для SsbB, и тем самым удовлетворять полную связывающую способность обоих белков в условиях реакции.

Совместимость связывания ДНК

также, по-видимому, регулирует совместную сборку SsbA и SsbB на олигомерах dT n , когда Mg 2+ включен в реакционный раствор. Хотя комплексы с двумя SsbA или двумя SsbB легко образовывались либо на dT 100 , либо на dT 130 в присутствии Mg 2+ , смешанные комплексы с одним SsbA и одним SsbB были обнаружены только с dT 130 (рис. 7).Если предполагается, что связывающая способность SsbA в этих условиях составляет ~ 65 нуклеотидов (SSB 65 -подобный режим), а связывающая способность SsbB также предполагается ~ 65 нуклеотидов (усиленный SSB 65 -подобный режим), Молекула dT , 130, могла бы удовлетворить полную связывающую способность одного SsbA и одного SsbB (всего ∼130 нуклеотидов), тогда как молекула dT 100 могла бы только частично удовлетворить связывающую способность двух белков. Таким образом, образование смешанных комплексов на dT 130 , но не на dT 100 , указывает на то, что SsbA и SsbB способны связываться независимо, но не могут участвовать в связывании с общей цепью в присутствии Mg . 2+ .

SsbA / B и SsbB

RYTP белки

Хотя SsbA и SsbB оказались несовместимыми для связывания с общей цепью, SsbA был способен образовывать смешанные комплексы в некоторых условиях связывания с общей цепью с двумя вариантами белка SSB: белком SsbA / B и белком SsbB RYTP .

Белок SsbA / B, в котором С-концевой домен белка SsbA заменен С-концевым доменом из белка SsbB, был приготовлен ранее для оценки вклада С-концевых доменов в свойства связывания ДНК. белков SsbA и SsbB [2].Было обнаружено, что предпочтения режима связывания ДНК белка SsbA / B аналогичны таковым у белка SsbA, предполагая, что первичные структурные детерминанты связывания ДНК могут содержаться в N-концевых доменах различных белков SSB [2]. Более того, белок SsbA / B был способен образовывать смешанный комплекс с SsbA на dT 90 в отсутствие Mg 2+ и на dT 100 в присутствии Mg 2+ (Фиг. гель не показан). Эти данные предполагают, что неспособность SsbA участвовать в связывании общей цепи с SsbB не может быть связана с несходным C-концевым доменом белка SsbB, поскольку C-концевой домен белка SsbA / B идентичен таковому. белка SsbB.Однако возможно, что C-концевой домен функционирует иначе в белке SsbB, чем в химерном белке SsbA / B, и вносит вклад в несовместимость SsbA и SsbB в связывании с общей цепью.

Белок SsbB RYTP , в котором последовательность 18 HKTN 21 белка SsbB заменена соответствующей последовательностью 18 RYTP 21 из белка SsbA, также был приготовлен в попытке определить структурная основа дифференциальных свойств связывания ДНК белков SsbA и SsbB.Было обнаружено, что ДНК-связывающие свойства белка SsbB RYTP аналогичны свойствам белка SsbB, что указывает на то, что последовательность 18 HKTP 21 может не отвечать за характерные предпочтения режима связывания ДНК белка SsbB ( см. Экспериментальные процедуры). Однако белок SsbB RYTP отличался от белка SsbB тем, что он был способен образовывать смешанный комплекс с SsbA на dT 90 в отсутствие Mg 2+ (Фиг.9).Эти результаты предполагают, что несовместимость связывания с общей цепью, которая наблюдалась с белками SsbA и SsbB в отсутствие Mg 2+ , не была связана с различием в их предпочтительных способах связывания ДНК, а может быть отнесена к разнице 18 RYTP 21 и 18 HKTN 21 последовательности этих белков. Однако наблюдение, что SsbB RYTP не смог образовать смешанный комплекс с SsbA на dT 100 в присутствии Mg 2+ , указывает на то, что этой разницы в последовательностях недостаточно для учета несовместимости связывания с общей цепью. это наблюдалось с SsbA и SsbB в присутствии Mg 2+ .Таким образом, введение последовательности 18 RYTP 21 в белок SsbB имеет эффект разъединения Mg 2+ -независимой несовместимости связывания с общей цепью от Mg 2+ -зависимой несовместимости.

Последовательность 18 RYTP 21 белка SsbA, по крайней мере, частично консервативна в белке SsbEc и в ряде других гомотетрамерных бактериальных белков SSB, чьи кристаллические структуры рентгеновских лучей были определены (фигура 11).Анализ различных структур показывает, что третичные складки N-концевых доменов во всех случаях схожи и что последовательность 18 RYTP 21 белка SsbA и дивергентная последовательность 18 HKTN 21 белка SsbB, соответствуют области Loop 1 на внешней поверхности субъединиц тетрамеров SSB (Рисунок 11) [6] - [7]. Различия в составе области петли 1 могут объяснять неспособность белков SsbA и SsbB участвовать в связывании с общей цепью в отсутствие Mg 2+ .Например, вариации петли 1 могут предположительно влиять на точную ориентацию цепи ДНК, когда она наматывается вокруг отдельных тетрамеров SSB, или влиять на способ взаимодействия двух тетрамеров SSB, когда они связаны в непосредственной близости на цепи ДНК. Однако, по-видимому, необходимы другие молекулярные детерминанты для совместимости связывания с общей цепью в присутствии Mg 2+ . Окончательное определение молекулярной основы связывания с общей цепью и совместимости связывания ДНК потребует дальнейшего структурного анализа различных комплексов SSB-dT n .Эти исследования в настоящее время ведутся в нашей лаборатории.

Рисунок 11. Петля 1 области бактериальных белков SSB.

A, Сравнение последовательностей из области Loop 1 белков SSB из Escherichia coli (код PDB 1eyg), Mycobacterium tuberculosis (код PDB 1ue1), Mycobacterium smegmatis (код PDB 1x3e), Helicobacter pylori (код PDB 2vw9) и Streptomyces coelicolor (код PDB 3eiv) с соответствующими последовательностями из белков SsbA и SsbB Streptococcus pneumoniae, . B, Структурная модель комплекса тетрамер SsbEc ( зеленый ) - одноцепочечная ДНК ( синий ) (на основе кода PDB 1eyg) [7]. Последовательность RYMP в области Loop 1 каждой субъединицы SsbEc выделена ( красный ).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024305.g011

Совместимость привязки SsbA и SsbB

SsbA является конститутивно экспрессируемым белком и предположительно функционирует как первичный белок SSB во время рутинной репликации и поддержания хромосомной ДНК в S.pneumoniae (аналог белка SsbEc в E. coli ). SsbB, напротив, индуцируется специфически во время естественной трансформации и временно связывается с одноцепочечной формой экзогенной ДНК до того, как ДНК будет включена в гомологичный участок хромосомы S. pneumoniae (аналог SsbB отсутствует. белок в E.coli ) [1], [8].

Степень, в которой белки SsbA и SsbB функционально взаимозаменяемы в этих различных активностях, не ясна.Наши результаты, однако, показывают, что белки SsbA и SsbB будут способны связываться вместе на более длинных одноцепочечных сегментах ДНК, где возможно независимое связывание, но предполагают, что они не могут совместно собираться на более коротких одноцепочечных сегментах ДНК, где согласованные взаимодействия между соседними SSB не требуется. Требование совместимости для связывания с общей цепью может предположительно служить механизмом самопознания, который регулирует способ взаимодействия SsbA и SsbB в S.пневмония .

Материалы и методы

Материалы

S. pneumoniae Белок SsbA [9], белок SsbB [10] и белок SsbA / B [2] получали, как описано ранее. Очищенные гелем олигомеры dT n были от Invitrogen. 32 Меченный на Р-конце dT n олигомеров получали с использованием [γ- 32 P] АТФ (PerkinElmer) и полинуклеотидкиназы Т4 (New England Biolabs).

Получение и характеристика белка SsbB

RYTP

Кодирующая последовательность белка SsbB RYTP , в которой была сгенерирована нуклеотидная последовательность белка SsbB, соответствующая аминокислотам 18 HKTN 21 , на последовательность, кодирующую аминокислоты 18 RYTP 21 . мутагенезом ПЦР с расширением перекрывания.Исходной матрицей мутагенеза была описанная нами ранее конструкция pETssbB, которая содержит последовательность SsbB дикого типа, клонированную в сайт NdeI / HindIII вектора экспрессии pET21a (Novagen) [10]. Праймер a (5'-CGGATAACAATTCCCCTCTAG-3 ') и праймер d (5'-TTAGCAGCCGGATCTCAGTGG-3') фланкировали ген ssbB , а праймер b (5'TAGTAGTCATTGGGAGTG) c (5'-GAATTGCGTTACACTCCAAATGACAAGTCGGTAGC-3 ') были внутренними перекрывающимися мутагенными праймерами (мутагенные основания подчеркнуты).Конечный продукт ПЦР, кодирующий SsbB RYTP , расщепляли с помощью NdeI и HindIII и затем клонировали в сайт NdeI / HindIII вектора экспрессии pET21a с получением конструкции pETssbB RYTP . Вставку секвенировали и обнаружили, что она идентична ожидаемой кодирующей последовательности белка SsbB RYTP .

Экспрессионная плазмида pETssbB RYTP была введена в E.coli штамм Rosetta (DE3) pLysS (Novagen), и белок SsbB RYTP был очищен из полученных клеток Rosetta (DE3) pLysS / pETssbB RYTP RYTP RYTP RYTP RYTP RYTP RYTP RYTP RYTP. процедура аналогична описанной ранее для белка SsbB дикого типа [10].Конечная фракция белка SsbB RYTP имела чистоту более 95% по данным электрофореза в SDS-полиакриламидном геле.

Очищенный белок SsbB RYTP охарактеризовали с использованием анализа связывания dT 35 , который был описан ранее для белков SsbA и SsbB [2]. Результаты были аналогичны тем, которые были получены с белком SsbB дикого типа, и показали, что белок SsbB RYTP был способен связывать две молекулы dT 35 в отсутствие Mg 2+ и два dT 35 молекул (с положительной межсубъединичной кооперативностью) в присутствии 10 мМ Mg 2+ .

Анализ для электрофореза в полиакриламидном геле

Растворы реакции связывания dT n (30 мкл) содержали 25 мМ трис ацетата (pH 7,5), 5% глицерина, 1 мМ дитиотреитола и концентрации ацетата магния, dT n ( 32 P-конец, меченный), и белок SSB, указанный в подписях к рисункам. Реакционные растворы инкубировали при 25 ° C в течение 15 минут, а затем добавляли 3 мкл раствора для загрузки геля (0,25% бромфенолового синего, 40% сахарозы).Аликвоту (20 мкл) конечного раствора анализировали электрофорезом на 5% природных полиакриламидных гелях с использованием буферной системы, состоящей из 25 мМ трис ацетата (pH 7,5) и той же концентрации ацетата магния, что и в реакционных растворах. Полосы, соответствующие несвязанным и связанным с SSB олигомерам dT n , визуализировали с использованием имидж-сканера Fuji FLA-7000. Конкретные концентрации белка для отдельных гелей на рисунках 2–9 были выбраны, чтобы проиллюстрировать зависящее от концентрации образование различных комплексов SSB-dT n .

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: FRB BS. Проведены эксперименты: БС ГА. Проанализированы данные: ФРБ БС. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: FRB BS GA. Написал статью: FRB BS.

Ссылки

  1. 1. Клаверис Дж. П., Мартин Б., Полард П. (2009) Механизм генетической трансформации: состав, локализация и механизм. FEMS Microbiol Rev 33: 643–656.
  2. 2. Grove DE, Bryant FR (2006) Влияние Mg 2+ на способы связывания ДНК белков SsbA и SsbB Streptococcus pneumonia .J Biol Chem 281: 2087–2094.
  3. 3. Grove DE, Willcox S, Griffith JD, Bryant FR (2005) Дифференциальные свойства связывания одноцепочечной ДНК паралогичных белков SsbA и SsbB из Streptococcus pneumoniae . J Biol Chem 280: 11067–11073.
  4. 4. Шереда Р.Д., Козлов А.Г., Лохман Т.М., Кокс М.М., Кек Дж.Л. (2008) SSB как организатор / мобилизатор комплексов поддержания генома. Crit Rev Biochem Mol Biol 43: 289–318.
  5. 5. Lohman TM, Ferrari ME (1994) Escherichia coli одноцепочечный ДНК-связывающий белок: множественные способы связывания ДНК и взаимодействия.Анну Рев Биохим 63: 527–570.
  6. 6. Сайкришнан К., Манджунатх Г.П., Сингх П., Джеякантан Дж., Даутер З. и др. (2005) Структура Mycobacterium smegmatis одноцепочечного ДНК-связывающего белка и сравнительное исследование с участием гомологичных SSB: биологические последствия структурной пластичности и изменчивости четвертичной ассоциации. Acta Crystallographica D61: 1140–1148.
  7. 7. Рагхунатан С., Козлов А.Г., Лохман Т.М., Ваксман Г. (2000) Структура ДНК-связывающего домена E.coli SSB, связанный с оцДНК. Nat Struct Biol 7: 648–652.
  8. 8. Morrison DA, Mortier-Barriere I, Attaiech L, Claverys JP (2007) Идентификация основного белкового компонента комплекса пневмококкового затмения. J Bacteriol 189: 6497–6500.
  9. 9. Steffen, SE, Bryant FR (2001) Очистка и характеристика одноцепочечного ДНК-связывающего белка из Streptococcus pneumoniae . Arch Biochem Biophys 388: 165–170.
  10. 10.Hedayati MA, Grove DE, Steffen SE, Bryant FR (2005) Экспрессия и очистка белка SsbB из Streptococcus pneumoniae . Protein Expr Purif 43: 133–139.

Папа Свинья Прикол - Novocom.top

Свинка Пеппа возвращается в кинотеатры, чтобы отпраздновать свое 15-летие

Мы любим свинка Пеппа Пеппа едет в Париж # 33 YouTube

Мем свинка пеппа свинка пеппа, De peppa, Caricaturas

MLG Peppa Pig Peppa's Air Horn! YouTube

Gif-анимации свиньи Пеппы ~ Gifmania

свинья папа пеппа жир баннер

свинья папа плачет грустно почему

папа свинья

свинья папа пеппа мем рост вес возраст перси вики биография высокий био анимированный дошкольное телевидение британский персонаж сериал dreshare

свинья папа пеппа связанный

папа свинья

свинья пеппа, папа, беги, малышка, оставайся на канале, малыш

папа свинья

свинья папа право

свинья папа рост вес возраст мем био вики мемулос ноги

папа убивает мемы папа убивает мемы очень вики memesmonkey ebaumsworld

свинья папа ванна кровать спит booktrust

свинья пеппа папа официальный канал лицо бит праздник картина vaderdag lovekid

свинья папа глупый

свинья пеппа папа мультфильм мультики биты эпизоды дети

свинья папа свиньи пеппа папа верхом на лошадях ричард персонажи пеппапиг день рождения вики персонаж импримир пара папа отец разорвал артисты твари мумия

рубашка daddy pig business teepublic

папа свинья

свинья пеппа папа мем

свинья пеппа обои папа мумия джордж аниме в руках 1080 mlg винтовки очки с компьютерным фоном wallpaperplay

свинья папа пеппа знакомьтесь nickjr правда

свинья пеппа мем папа мумия мемы папа порно мама шаблон кулиандо ритп шаблон

свинья пеппа жир эпизоды английский

свинья пеппа папа бегает автобус исправляет канал официальный свиньи lovekid

свинья пеппа vsco папа смешные мемы стикеры хомяк обои george phone computer cartoon cakoti

свинья пеппа папа джордж аниме мумия куриная хижина 1080 обои 1920 разрешение 1280

свинья папа бекон рисунок людвиг ван бдсм рисунки распечатывает 17 декабря загружено

свинья пеппа испорченные мемы детство мем темный смешной секрет пенис член пенис папа свиньи pepe random knowyourmeme reddit redd mildlypenis

свинья пеппа мем обои мемы рисовать пещера спросил брат

свинья пеппа папа беги забава пингвин книги свиньи божья коровка

свинья пеппа мистер паук забанен

свинка пеппа отредактировал эпизод другое развлечение

мемов папы-свиньи - Новоком.верх

мем бегущий свинья 90е папа

папа мемы пеппа

свинья мем папа

мем свинка пеппа папа мем смотрит

свинья мемы

свинья пеппа жирный папа непослушный издевательства глупо говорю я учу детей глаз телевизор

свинья папа пеппа мем рост возраст вес перси вики биография высокий био анимированный телевидение дошкольное учреждение британский персонаж сериал dreshare

свинья пеппа мемы папа отредактировал эпизод

пеппа толстый папа зовет свинью мем imgflip живот

свинья пеппа папа мем

свинья папа мем imgflip caption

мемы свинья пеппа мемы папа триггер армия зоопарк

февраль

мем imgflip свинья папа расширяет мозг

свинья пеппа мем папа создатель мемов

свинья папа парень угадай разве мемы

мем свинья папа мемы пеппа джордж создать арсенал свинка английский

свинья пеппа мумия смешные мемы папа написал мутные лужи цитаты жизньloveanddirtydishes мама голос любит день рождения

свинка пеппа дикарь мемы чистый папа времена плохой абсолютный buzzfeed смех поттер гарри найден телемаркет метро tr

свинка пеппа мемы из гетто

папа свинья

мем свинка пеппа мемы папа джордж арсенал комиксы русский ритп шаблон свинка

свинья пеппа папа мемы мемы

свинья пеппа мемы папа папа свинья тупой мем дикая мать

«Папа», «Свинья», умирает (танец с гробом, «мем») YouTube

свинка пеппа папа животик redbubble одежда рубашка

свинья папа рост вес возраст мем био вики мемулос ноги

свинка пеппа финал трейлер мемы мемы танос официальный смена папа ужастик друзья теория

свинка пеппа дикарь мемы смешной папа buzzfeed absolute meme раз папа чистый голос коричневый развлечения она тупица

свинья пеппа обои папа мумия джордж аниме 1080 носить руки винтовки mlg очки с компьютерным фоном wallpaperplay

Por culpa de Peppa î €€ Pigî € nià ± os se niegan a comer lechona

свинья пеппа мемы смешно дикие времена абсолютный мопс мем buzzfeed папа цитаты глупые свиньи высота peepa мультфильмы коричневый актив да

казино выигрыш шума rytp

Lucky 7 Casino онлайнHet bedrijf WHG Limited moest eind vorig jaar ook een bedrag van 300.В de laatste vier Europese kwalificatieduels werd er ook viermaal gewonnen, het is ook in all die duels het eigen doel schoon te houden.00 евро для продвижения ван де канспелен ван Симбат., gta 5 лучших бригад по ограблению казино PSV mag dus aan de bak.In de voorbereiding op het nieuwe seizoen gingen vele wedstrijden kansloos verloren. het kwam zeven keer tot scoren. lucky days casino скачать

онлайн-казино askgamblersVoor beide partijen lijkt de boete grotere gevolgen te hebben, aangezien de bedrijven minder snel in aanmerking zullen komen voor een vergunning.De Eindhovense ploeg verloor de wedstrijd voor de Johan Cruijff Schaal, wist niet verder te komen dan een gelijkspel bij FC Twente en ging onderuit in het tweeluik tegen ФК Базель. , 35 евроFeyenoord scoort minimaal twee doelpunten: 1,36 евроMinimaal drie doelpunten: 1,50 евро Оценка Beide ploegen: 1,74 евро, casino monte carlo tepic De Georgische ploeg is koploper in eigen land en kwam in de laar lief maels 22st duels 45 голов забит.De Ajacieden beginnen het Europese avontuur в Griekenland, namelijk op b casino win noise rytp ezoek bij PAOK Saloniki.Green en William Hill в 2018 al aan de beurtIn 2018 kreeg ook casino win noise rytp het 21 online casino отзыв

pokerstars casino nlGeen hoopvolle statistieken for PSV, maar het is wel een feit dat de Nederlandse ploeg over veel m casino win noise rytp eer kwaliteit beschikt.r.Momenteel richt de Kansspelautse go незаконный онлайн., gta v глюк онлайн-казино В 2020 году цена: 1,55 евро, минимальная стоимость: 1,76 евро, минимальная стоимость: 2,02 евро 2,65 euroFC Haugesund - PSVPSV trapt het Europa League-seizoen ook from 19:00 uur.Volgens de KSA zou Bwin een groot aanbod aan sportweddenschappen aanbieden, maar ook de mogelijkheid bieden tothe спеленет в покерных играх. онлайн3 казино

шум выигрыша казино rytp по qqnex Dit artikel is 9515 keer getweet en bevat 371 gebruikerscommentaar.

бесплатных обоев HD | Обои-HD.Com

HD обои для телефона. Поднимите свой стиль телефона на новый уровень с великолепными обоями для телефона от Unsplash.Наше сообщество профессиональных фотографов предоставило тысячи красивых изображений, и все они могут быть загружены бесплатно. HD обои для Android. Обои для рабочего стола HD.


Загрузите и используйте 50 000+ стоковых фотографий для мобильных устройств бесплатно. Тысячи новых изображений каждый день совершенно бесплатно Высококачественные видео и изображения с Pexels


Найдите лучшие бесплатные стоковые изображения высокого разрешения об обоях для телефона.Загрузите все мобильные обои и используйте их в качестве обоев для своего iPhone и других мобильных устройств. в 2021 году


Лучшие обои для телефона HD. Большая коллекция лучших HD-обоев для телефонов для настольных компьютеров, ноутбуков и мобильных телефонов. Мы собрали более 5 миллионов загруженных изображений…


Тонны потрясающих 4k телефонных HD-обоев, которые можно загрузить бесплатно.Вы также можете загружать и делиться своими любимыми HD-обоями для телефона в формате 4k. HD обои и фоновые изображения


Выберите один из лучших обоев для Android, идеально подходящий для фона вашего телефона или экрана блокировки. Бесплатная загрузка Коллекция Handpicked collection в HD и 4K


Загрузите красивые обои для Android на свой телефон Android.Каждое изображение высокого качества и оптимизировано для вашего экрана с высоким разрешением. Всегда бесплатно на Unsplash. Обои для рабочего стола HD Design. Обои HD Feeling. HD обои для рабочего стола. Обои для рабочего стола HD Event. HD спортивные обои.


25 июня 2021 г. - Хотите нарядить свое беспроводное устройство? Посмотрите эти замечательные обои, которые сделают ваш день немного радостным и неповторимым !.Найдите больше идей о pizzazz, обоях для мобильных телефонов, обоях галактики.


14 июня 2020 г. · Есть также специальные сайты обоев для телефонов, на которых многие пользователи делятся своими творениями. Давайте посмотрим на 10 лучших источников для загрузки обоев для телефона. UnSplash - Лучшее для фотографических изображений.Unsplash - один из самых популярных веб-сайтов для обмена бесплатными изображениями. На этой платформе размещены тысячи изображений, предоставленных ...


30 июля, 2021 · Пять главных рисков обоев для iPhone для девочек | Обои для Iphone для девочек от Марии Буллок 30 июля 2021 года в телефоне Обои | No Comments Обои для iPhone - это способ персонализировать свой iPhone в соответствии с вашим настроением или стилем вашей одежды.


22 февраля 2021 г. · Обои - один из лучших способов отличить ваше устройство от всех остальных. И даже если у вас сейчас нет лучшего iPhone, новые обои определенно помогут сделать ваш телефон свежим и новым.Кроме того, когда у вас есть любимые обои на вашем устройстве, они демонстрируют ваш личный стиль и чутье, будь то экран блокировки или главный экран.


28 марта 2021 г. · Выберите «Настройки»> «Обои»> «Выбрать новые обои». Выберите изображение из Apple Dynamic, Stills, Live или одну из ваших собственных фотографий.Поместите и перетащите, чтобы переместить изображение, или ущипните, чтобы увеличить или ...


4 июля 2021 г. · Zedge - это не только приложение для обоев, но и огромная коллекция рингтонов. Это одно из самых популярных приложений для загрузки обоев и рингтонов для телефонов Android. Это приложение может предоставить вам лучшие фоновые обои бесплатно! На Zedge вы найдете все типы обоев и фонов, от HD-обоев до живых обоев.


11 февраля 2020 г. - Ищите бесплатные обои, рингтоны и уведомления на Zedge и персонализируйте свой телефон по своему вкусу. Начните поиск прямо сейчас и освободите свой телефон. # обои # телефонные обои. Найдите больше идей о 4k обои для телефона, обои для телефона, обои.


Классные обои.Лучший сайт обоев для вашего телефона и устройства. устройство; фантазия; природа; Телефон; пространство; Поиск. Приветственное содержание. Телефон Обои Котировки Hd. by faine · 24 декабря, 2020. Fractal Wallpaper Phone. by faine · 23 декабря, 2020. Леви Акерман Обои Телефон. by faine · 23 декабря, 2020. Обои для телефона R5.


О прессе Авторские права Связаться с нами Создатели Реклама Разработчики Условия Политика конфиденциальности и безопасность Как работает YouTube Тестирование новых функций Авторские права для прессы Свяжитесь с нами Создатели...


11 авг.2020 г. · 6. Фоновые изображения - Обои. Украсьте свой дом и заблокируйте экран с помощью Backdrops, одного из лучших фоновых приложений для Android. В приложении есть три вкладки: сообщество, исследование, коллекции и избранное. На вкладке сообщества есть множество фонов для вашего телефона.Вы можете сохранить, добавить в избранное или установить любое изображение в качестве обоев в приложении.


28 июля, 2021 · Скачать 4к обои ultra hd лучшая коллекция. Найдите больше идей о телефонных обоях, 4k обоях для телефона, обоях. 4k ultra hd phone wallpapers скачать бесплатно коллекцию фоновых изображений, высококачественные красивые 4k обои для вашего мобильного телефона.Выбирайте из тщательно подобранных обоев в формате 4k для экранов мобильных устройств и настольных компьютеров.


, 24 июля 2021 г. - Исследуйте доску Джейми и Кейта Х. «Обои», за которыми следят 1706 человек на Pinterest. Найдите больше идей о обои для iphone, обои для рабочего стола, обои для телефона.


9 февраля 2013 г. · Крылатый дракон Ра (2160x3840) 19.0 комментариев. 386. Автор. u / FredG1978. 1 день назад.


10 лучших приложений для обоев для iPhone и Android (2021 г.) 1. Wallcraft. Если вы искали лучшие приложения для обоев для Android и iOS, вам больше не нужно искать. Wallcraft имеет более 10000+ обоев Full HD, 5000+ обоев для дисплея 2K и более 1000+ обоев 4K для смартфонов.А самое приятное - это только приложение ...


29 июля 2021 г. · Здесь вы можете найти лучший и самый великолепный каталог мобильных обоев и фонов Александры Даддарио для вашего телефона Android, такого как Samsung, Oppo, Vivo, Realme, Redmi, LG, Huawei и др .. Обои для мобильных устройств Александры Даддарио.В этом разделе мы бесплатно предоставляем уникальную и классную коллекцию лучших фонов и обоев. Наша команда выбирает лучшие обои из всех…


2 августа 2021 г. · Топ 5 лучших HD обоев для мобильного телефона, подсказки, подсказки, руководства, обзоры, промокоды, пасхальные яйца и многое другое для приложения Android.Избегайте топ-5 лучших читов для взлома HD-обоев для мобильного телефона для вашей собственной безопасности, выбирайте наши советы и рекомендации, подтвержденные профессиональными игроками, тестировщиками и такими же пользователями, как вы. Задайте вопрос или добавьте ответы, посмотрите видеоуроки и поделитесь своим мнением об этой игре / приложении.


Однако найти хорошие обои очень непросто.Итак, чтобы помочь вам найти лучшие обои для вашего смартфона, я создал эту огромную коллекцию из 4000+ потрясающих обоев в формате Full HD для телефонов Android и iPhone. Прокрутите вниз, чтобы просмотреть все удивительные обои, которые мы предоставили для вашего смартфона.


Проверьте http: // www.squarespace.com, чтобы получить бесплатную пробную версию, или перейдите по адресу http://squarespace.com/sambeckman, чтобы сэкономить 10% на первой покупке веб-сайта или домена.I ...


Iphone темно-синие обои HD. Iphone XR синий. Небо обои 6. 1920 × 1080 черно-синие абстрактные широкоформатные обои HD. Темно-синий космос iphone 6 обои галактика фотографии pinterest.Темно-синие обои для iphone - лучшее изображение обоев для iphone в 2020 году. Темно-синие космические обои для iphone 5 скачать бесплатно на iphonewalls.


10 декабря 2020 г. · Вот список 10 лучших приложений для обоев для Android 1. Обои ZEDGE (бесплатные и платные) ZEDGE - самое популярное приложение для обоев, когда речь идет о HD-обоях для мобильных телефонов.ZEDGE идеально подходит для разнообразия и категорий обоев, которые у него есть. Качество 90% обоев на высшем уровне.


31 дек. 2019 г. · Коллекция полноцветных цветных обоев - главные достоинства. Этот набор с @EvgeniyZemelko и @ onglion11 представляет собой полный набор великолепных цветов, которые непременно появятся на вашем iPhone.1) Цветные обои Full Spectrum 2) Обои для iPhone WWDC 2019 Среди неизменно популярных публикаций обоев каждый год есть специальные версии для Apple Media…


19 ноября, 2019 · В этом приложении для Android есть множество классных обоев для телефонов с разрешением 1920 × 1080, QHD, 4K и UHD.Имеется коллекция 65…


26 мая 2020 г. · Abstruct - одно из приложений для обоев, которое вы всегда найдете бесподобным. В нем представлена ​​коллекция абстрактных обоев нескольких цветов. Всего существует около 300 обоев, и все они в разрешении 4K. Со временем мы ожидаем, что в приложение попадет больше обоев.


3 января 2020 г. · WLPPR - лучшие приложения для обоев для iPhone, любители природы. Вы можете искать среди множества естественных изображений, чтобы ваши обои на iPhone оставались живыми. Он также подходит для экрана блокировки iPhone для получения привлекательных изображений на вашем экране. …


13 марта 2021 г. · Не забудьте добавить в закладки лучшие обои для iphone 11, используя Ctrl + D (ПК) или Command + D (macos).Если вы используете мобильный телефон, вы также можете использовать панель меню из браузера. Будь то Windows, Mac, iOS или Android, вы сможете…


1 августа 2021 · Автор Crypto102 Thế giới tiền điện tử. 1 августа 2021 г. в Danh sách COIN. 0. Топ-10 новостей об ОБОИ AXIE INFINITY за неделю.Щелкните каждую ссылку, чтобы увидеть больше. Вы видели новости о: ———- Вы также должны прочитать больше новостей ниже: —–. LỪA ĐẢO QUA VÍ ĐIỆN TỬ | …


30 000+ лучших 4k обоев · 100% бесплатная загрузка · Pexels Stock Photos.

Оставьте первый комментарий

Оставить комментарий

Ваш электронный адрес не будет опубликован.


*